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rodickholm

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是低拷贝,可以收至少500ml菌,多次上柱离心,提高浓度

[ 发自小木虫客户端 ]
11楼2015-08-01 10:03:39
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表弟爱网游

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果你的菌是低拷贝,可以尝试分5管提,最后加水溶解过滤膜上的质粒时,只第一管加水,把第一管离心下来的水加入到第二管,在加入到第三管,依次下去,浓度会很高。加水一定要加到膜上面溶解。我没用过你这种试剂盒,具体情况不太清楚。我以前用都是国产的柱子提的。低拷贝质粒就5到8管合成一管,浓度都足够了。
当一切如飞舞的落叶坠落,惋惜之余,也要学会原谅与释怀
12楼2015-08-02 04:27:52
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dd812007135

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by fengjunchen at 2015-08-01 09:37:03
测了od600没?离心沉淀下来的的菌多不?怕是没摇起来……这浓度也太低了。

第一步我就特别注意,让它完全悬浮,
13楼2015-08-02 09:26:51
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dd812007135

木虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by tupo44 at 2015-08-01 09:48:38
确定是高拷贝数质粒么,用的哪个菌克隆

不知道是不是高拷贝的,这个是老师设计的质粒,我们是用大肠杆菌培养克隆
14楼2015-08-02 09:27:45
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带壳的鸡蛋

金虫 (小有名气)

最后那步加的量减少,不按照建议的来。
15楼2015-08-02 17:34:18
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linglingys

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

本人之前也是抽提浓度低,后来换种感受态就OK了
16楼2015-08-02 20:08:31
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wuwenmei

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

浓度只有60ng/ml??这个你是怎么检测的???
下雨天就算没有伞,我也要学会努力奔跑!
17楼2015-08-03 10:52:37
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zxfeffie

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dd812007135: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-08-04 12:17:42
你们三个人都是这种情况的话,我建议换一换菌种吧。我之前提取高拷贝的T载体时也偶尔会很低,只有几十ng,重新转化新菌种在提取就好了。
18楼2015-08-03 15:36:10
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ssswzf

金虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

群主你的质粒保存多久了?如果量特别低的话,是不是考虑一下重新转化宿主菌,然后再提质粒看看!另外,你用的柱子提取吧!
19楼2015-08-24 13:37:20
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