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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取为什么浓度不高
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rodickholm

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是低拷贝，可以收至少500ml菌，多次上柱离心，提高浓度

[ 发自小木虫客户端 ]
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11楼2015-08-01 10:03:39
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表弟爱网游

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果你的菌是低拷贝，可以尝试分5管提，最后加水溶解过滤膜上的质粒时，只第一管加水，把第一管离心下来的水加入到第二管，在加入到第三管，依次下去，浓度会很高。加水一定要加到膜上面溶解。我没用过你这种试剂盒，具体情况不太清楚。我以前用都是国产的柱子提的。低拷贝质粒就5到8管合成一管，浓度都足够了。
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当一切如飞舞的落叶坠落，惋惜之余，也要学会原谅与释怀
12楼2015-08-02 04:27:52
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dd812007135

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by fengjunchen at 2015-08-01 09:37:03
测了od600没？离心沉淀下来的的菌多不？怕是没摇起来……这浓度也太低了。

第一步我就特别注意，让它完全悬浮，
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13楼2015-08-02 09:26:51
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dd812007135

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by tupo44 at 2015-08-01 09:48:38
确定是高拷贝数质粒么，用的哪个菌克隆

不知道是不是高拷贝的，这个是老师设计的质粒，我们是用大肠杆菌培养克隆
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14楼2015-08-02 09:27:45
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带壳的鸡蛋

金虫 (小有名气)
最后那步加的量减少，不按照建议的来。
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15楼2015-08-02 17:34:18
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linglingys

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

本人之前也是抽提浓度低，后来换种感受态就OK了
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16楼2015-08-02 20:08:31
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wuwenmei

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

浓度只有60ng/ml??这个你是怎么检测的？？？
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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
17楼2015-08-03 10:52:37
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zxfeffie

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dd812007135: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-08-04 12:17:42
你们三个人都是这种情况的话，我建议换一换菌种吧。我之前提取高拷贝的T载体时也偶尔会很低，只有几十ng，重新转化新菌种在提取就好了。
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18楼2015-08-03 15:36:10
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ssswzf

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

群主你的质粒保存多久了？如果量特别低的话，是不是考虑一下重新转化宿主菌，然后再提质粒看看！另外，你用的柱子提取吧！
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19楼2015-08-24 13:37:20
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