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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取为什么浓度不高
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dd812007135

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒提取为什么浓度不高 已有10人参与

我是用Endo-free plasmid Mini KitⅡ抽取质粒的，用了50ml的培养液过夜培养大肠杆菌，第二天抽取后发现浓度只有60ng/ml,浓度低的原因到底是什么呢？
第一次离心后发现菌体沉淀很多，我就把SOlution1,solution2 加大了一倍，这样可以吗？
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1楼 2015-07-29 20:57:34
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表弟爱网游

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果你的菌是低拷贝，可以尝试分5管提，最后加水溶解过滤膜上的质粒时，只第一管加水，把第一管离心下来的水加入到第二管，在加入到第三管，依次下去，浓度会很高。加水一定要加到膜上面溶解。我没用过你这种试剂盒，具体情况不太清楚。我以前用都是国产的柱子提的。低拷贝质粒就5到8管合成一管，浓度都足够了。
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当一切如飞舞的落叶坠落，惋惜之余，也要学会原谅与释怀
12楼2015-08-02 04:27:52
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查看全部 19 个回答

jonew

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
三个溶液都加大一倍，没有问题

[ 发自小木虫客户端 ]
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借口很贱，，，
2楼2015-07-29 21:45:10
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dd812007135

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jonew at 2015-07-29 21:45:10
三个溶液都加大一倍，没有问题

如果裂解液加大一倍，是不是后续步骤的试剂也要加大一倍
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3楼2015-07-29 22:48:06
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哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-30 23:23:50
dd812007135: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-07-31 10:52:40
你提的浓度太低啦，我最高提过1000ng/ul，也是Endo-Free,你是不是把试剂加错了，再仔细检查一下protol
赞一下(1人) 回复此楼
啊
4楼2015-07-30 19:58:18
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查看全部 19 个回答
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