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dd812007135

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒提取为什么浓度不高 已有10人参与

我是用Endo-free plasmid Mini KitⅡ抽取质粒的,用了50ml的培养液过夜培养大肠杆菌,第二天抽取后发现浓度只有60ng/ml,浓度低的原因到底是什么呢?
第一次离心后发现菌体沉淀很多,我就把SOlution1,solution2 加大了一倍,这样可以吗?
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表弟爱网游

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果你的菌是低拷贝,可以尝试分5管提,最后加水溶解过滤膜上的质粒时,只第一管加水,把第一管离心下来的水加入到第二管,在加入到第三管,依次下去,浓度会很高。加水一定要加到膜上面溶解。我没用过你这种试剂盒,具体情况不太清楚。我以前用都是国产的柱子提的。低拷贝质粒就5到8管合成一管,浓度都足够了。
当一切如飞舞的落叶坠落,惋惜之余,也要学会原谅与释怀
12楼2015-08-02 04:27:52
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jonew

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
三个溶液都加大一倍,没有问题

[ 发自小木虫客户端 ]
借口很贱,,,
2楼2015-07-29 21:45:10
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dd812007135

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jonew at 2015-07-29 21:45:10
三个溶液都加大一倍,没有问题

如果裂解液加大一倍,是不是后续步骤的试剂也要加大一倍
3楼2015-07-29 22:48:06
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哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-30 23:23:50
dd812007135: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-07-31 10:52:40
你提的浓度太低啦,我最高提过1000ng/ul,也是Endo-Free,你是不是把试剂加错了,再仔细检查一下protol
4楼2015-07-30 19:58:18
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