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小小八八

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 急，之前提质粒浓度正常，这段时间提出来浓度都很低为什么已有8人参与

已经将我的目地基因导入T载，提质粒进行后续实验，之前提的质粒都有200ng/ul左右，最近两次所提出的质粒浓度很低，只有50ng/ul。
质粒提取试剂盒肯定没问题，因为实验室其他同学也在做，都正常
之前几次和现在的区别就是我从同一个平板的不同区域挑的菌，这个菌都是来自同一根液体LB试管（难道当时我从液体接到平板的时候就挑了不同质粒拷贝数的菌液？）然后提出来浓度有200左右的菌平板上已经被我刮得很干净了，所以我换了另一个区域刮（总共四个区域），有没有可能是amp失效了，所以质粒丢失，那么我现在想到两个方法：
1.从原来那个刮完的平板上再刮菌转接平板，但如果是amp失效的情况下，那这个区域的菌质粒是不是也会丢失，如果是，那这个方法应该不能提高质粒浓度
2我当时提过一次原来区域菌的质粒，测了浓度有170多ng/ul，用了一部分，还有几ul。那我将质粒重新转化DH5a，会改善这个情况么？？？两个方法哪个更有效？

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1楼2015-10-16 11:39:32

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liping121200

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引用回帖:

17楼: Originally posted by 小小八八 at 2015-10-16 16:47:56
那拿我提出来的50多浓度的质粒转化可以吗？为什么会出现这种情况呢？是不是因为平板上的amp失效了，所以质粒部分丢失？如果是这样的话是不是说明我原来那个平板上所有4个区域的菌质粒都部分丢失了？

...

挑菌挑的是单菌落，摇菌的时候也会加amp的呀，应该不会存在amp失效的问题，如果是amp失效，你的菌可能就摇不起来，即使摇菌不加amp你提出来的质粒就有问题了，很有可能提出来的就不是你想要的质粒。要是你之前170的浓度质粒用的比较好，就用这个，比较保险。