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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 急，之前提质粒浓度正常，这段时间提出来浓度都很低为什么
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小小八八

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
20楼: Originally posted by ctt1984 at 2015-10-17 13:56:39
可能是菌体退化了
重新转化一次就好。记得转化完后挑单菌落用15%甘油保存细菌放置于负70度冰箱，每次做挑一点出来直接摇菌即可。平板放在四度最多几周就不能用了。

嗯，以前从来没出现过这种问题，我连在T载上的基因做了2，3个月质粒提出来还是200多，这个还是新的平板，我刚把目地基因连到T载上连接成功保存的平板，才提了一次，第二次浓度就降到50了，这正常吗？
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21楼2015-10-18 15:49:03
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小小八八

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by liping121200 at 2015-10-17 09:52:01
挑菌挑的是单菌落，摇菌的时候也会加amp的呀，应该不会存在amp失效的问题，如果是amp失效，你的菌可能就摇不起来，即使摇菌不加amp你提出来的质粒就有问题了，很有可能提出来的就不是你想要的质粒。要是你之前170的 ...

那是为什么呢？我切过我提的质粒，有条带，只是很暗，但切出来的大小是对的如果不是amp失效，质粒部分丢失那不明白为什么平板上的菌提出来的质粒浓度会下降这么多？明明我提质粒的时候离下来的菌很多啊一般都是过夜每根试管取3ml菌液离心的
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22楼2015-10-18 15:52:53
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竹叶水

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定质粒是你预设的（酶切，测序），剩下才是酶切所用质粒量的问题，多提几支即可，若想要质粒浓度高些的，可几管合并到一个吸附柱上，或含质粒的洗脱液再用于洗脱另一个吸附柱，或者洗脱后浓缩。质粒量是个小问题，酶切，回收，连接，转化，比较容易出问题。但质粒是源头，要保质保量。

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23楼2015-10-18 16:05:14
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赵鑫易

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.挑几个单菌落到la中重新amp压力选择
2.转化
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24楼2015-10-18 16:07:04
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小小八八

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
23楼: Originally posted by 竹叶水 at 2015-10-18 16:05:14
确定质粒是你预设的（酶切，测序），剩下才是酶切所用质粒量的问题，多提几支即可，若想要质粒浓度高些的，可几管合并到一个吸附柱上，或含质粒的洗脱液再用于洗脱另一个吸附柱，或者洗脱后浓缩。质粒量是个小问题， ...

不是，现在我的问题是我提出来的质粒浓度太低，同样的试剂盒都是我操作，之前都有200左右，现在只有50 ，是什么原因，有什么办法可以改变这种情况
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25楼2015-10-18 16:46:14
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小小八八

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
24楼: Originally posted by 赵鑫易 at 2015-10-18 16:07:04
1.挑几个单菌落到la中重新amp压力选择
2.转化

你说的就是我问的两种方案，现在在做第二种，第一种做过了，挑了菌重新在amp板上转接一次，质粒浓度还是只有50多
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26楼2015-10-18 16:47:39
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gookies

新虫 (初入文坛)
楼主最后是怎么解决这个问题的？
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27楼2015-10-19 09:23:36
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chs4502

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

多提个几管子质粒，浓缩到你想要的浓度不就OK了么？
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28楼2015-10-19 12:34:21
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小小八八

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
27楼: Originally posted by gookies at 2015-10-19 09:23:36
楼主最后是怎么解决这个问题的？

正在做第二种方案，今天提质粒，等下测下浓度看看
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29楼2015-10-20 08:51:57
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小小八八

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
28楼: Originally posted by chs4502 at 2015-10-19 12:34:21
多提个几管子质粒，浓缩到你想要的浓度不就OK了么？

如果前面两种方法都不行，就只剩下这种方法了，但是我提质粒提的很频繁，这样也浪费试剂啊
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30楼2015-10-20 08:54:57
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