24小时热门版块排行榜    

查看: 5826  |  回复: 29
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小小八八

铁虫 (初入文坛)

[求助] 急,之前提质粒浓度正常,这段时间提出来浓度都很低为什么 已有8人参与

已经将我的目地基因导入T载,提质粒进行后续实验,之前提的质粒都有200ng/ul左右,最近两次所提出的质粒浓度很低,只有50ng/ul。
质粒提取试剂盒肯定没问题,因为实验室其他同学也在做,都正常
之前几次和现在的区别就是我从同一个平板的不同区域挑的菌,这个菌都是来自同一根液体LB试管(难道当时我从液体接到平板的时候就挑了不同质粒拷贝数的菌液?)然后提出来浓度有200左右的菌平板上已经被我刮得很干净了,所以我换了另一个区域刮(总共四个区域),有没有可能是amp失效了,所以质粒丢失,那么我现在想到两个方法:
1.从原来那个刮完的平板上再刮菌转接平板,但如果是amp失效的情况下,那这个区域的菌质粒是不是也会丢失,如果是,那这个方法应该不能提高质粒浓度
2我当时提过一次原来区域菌的质粒,测了浓度有170多ng/ul,用了一部分,还有几ul。那我将质粒重新转化DH5a,会改善这个情况么??? 两个方法哪个更有效?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liping121200

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 小小八八 at 2015-10-16 16:47:56
那拿我提出来的50多浓度的质粒转化可以吗?为什么会出现这种情况呢?是不是因为平板上的amp失效了,所以质粒部分丢失?如果是这样的话是不是说明我原来那个平板上所有4个区域的菌质粒都部分丢失了?...

挑菌挑的是单菌落,摇菌的时候也会加amp的呀,应该不会存在amp失效的问题,如果是amp失效,你的菌可能就摇不起来,即使摇菌不加amp你提出来的质粒就有问题了,很有可能提出来的就不是你想要的质粒。要是你之前170的浓度质粒用的比较好,就用这个,比较保险。
好好学习,天天向上
19楼2015-10-17 09:52:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 30 个回答

Eternity宇

禁虫 (著名写手)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小小八八: 金币+2, 有帮助 2015-10-16 12:04:02
本帖内容被屏蔽

2楼2015-10-16 11:53:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小八八

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Eternity宇 at 2015-10-16 11:53:08
重新转的话比较稳妥一点儿,因为不知道你摇菌的时间和Amp加的量所以不太敢确定是不是摇的问题……

都是过夜摇菌,amp终浓度都是一样的,我提质粒提了很多次了,操作都是一样的,应该不是摇菌的问题,那我重新转化的话我的质粒浓度能提高回来吗?好怕质粒浓度就上不去了那我后面酶切连接都没法做了,已经做了4个月酶切连接,一点进展都没有,这几次提质粒发现质粒浓度都上不去
3楼2015-10-16 12:03:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小八八

铁虫 (初入文坛)

还想问一下,我如果用提出来的浓度50多的质粒还是说要用浓度170多的质粒重新转化的话我的质粒浓度能提高回来吗?哪个效果更好?好怕质粒浓度就上不去了那我后面酶切连接都没法做了,已经做了4个月酶切连接,一点进展都没有,这几次提质粒发现质粒浓度都上不去
4楼2015-10-16 12:05:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +5 启萌科技 2026-08-12 16/800 2026-08-14 16:02 by 启萌科技
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +4 Ldrop2023 2026-08-13 4/200 2026-08-14 14:50 by Tide man
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] filecode +5 cratir 2026-08-14 9/450 2026-08-14 12:25 by 医学老男孩
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +10 Tide man 2026-08-10 11/550 2026-08-14 10:30 by 沁言学术
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见