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小小八八

铁虫 (初入文坛)

[求助] 急,之前提质粒浓度正常,这段时间提出来浓度都很低为什么已有8人参与

已经将我的目地基因导入T载,提质粒进行后续实验,之前提的质粒都有200ng/ul左右,最近两次所提出的质粒浓度很低,只有50ng/ul。
质粒提取试剂盒肯定没问题,因为实验室其他同学也在做,都正常
之前几次和现在的区别就是我从同一个平板的不同区域挑的菌,这个菌都是来自同一根液体LB试管(难道当时我从液体接到平板的时候就挑了不同质粒拷贝数的菌液?)然后提出来浓度有200左右的菌平板上已经被我刮得很干净了,所以我换了另一个区域刮(总共四个区域),有没有可能是amp失效了,所以质粒丢失,那么我现在想到两个方法:
1.从原来那个刮完的平板上再刮菌转接平板,但如果是amp失效的情况下,那这个区域的菌质粒是不是也会丢失,如果是,那这个方法应该不能提高质粒浓度
2我当时提过一次原来区域菌的质粒,测了浓度有170多ng/ul,用了一部分,还有几ul。那我将质粒重新转化DH5a,会改善这个情况么??? 两个方法哪个更有效?
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liping121200

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-10-16 20:10:58
既然试剂盒没有问题,我觉着你还是重新拿你留的那份浓度170质粒重新转一下,这样比较保险,省得这么费事,转化用的质粒很少就够了
好好学习,天天向上
15楼2015-10-16 15:51:51
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liping121200

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 小小八八 at 2015-10-16 16:47:56
那拿我提出来的50多浓度的质粒转化可以吗?为什么会出现这种情况呢?是不是因为平板上的amp失效了,所以质粒部分丢失?如果是这样的话是不是说明我原来那个平板上所有4个区域的菌质粒都部分丢失了?...

挑菌挑的是单菌落,摇菌的时候也会加amp的呀,应该不会存在amp失效的问题,如果是amp失效,你的菌可能就摇不起来,即使摇菌不加amp你提出来的质粒就有问题了,很有可能提出来的就不是你想要的质粒。要是你之前170的浓度质粒用的比较好,就用这个,比较保险。
好好学习,天天向上
19楼2015-10-17 09:52:01
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