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小小八八

铁虫 (初入文坛)

[求助] 急,之前提质粒浓度正常,这段时间提出来浓度都很低为什么 已有8人参与

已经将我的目地基因导入T载,提质粒进行后续实验,之前提的质粒都有200ng/ul左右,最近两次所提出的质粒浓度很低,只有50ng/ul。
质粒提取试剂盒肯定没问题,因为实验室其他同学也在做,都正常
之前几次和现在的区别就是我从同一个平板的不同区域挑的菌,这个菌都是来自同一根液体LB试管(难道当时我从液体接到平板的时候就挑了不同质粒拷贝数的菌液?)然后提出来浓度有200左右的菌平板上已经被我刮得很干净了,所以我换了另一个区域刮(总共四个区域),有没有可能是amp失效了,所以质粒丢失,那么我现在想到两个方法:
1.从原来那个刮完的平板上再刮菌转接平板,但如果是amp失效的情况下,那这个区域的菌质粒是不是也会丢失,如果是,那这个方法应该不能提高质粒浓度
2我当时提过一次原来区域菌的质粒,测了浓度有170多ng/ul,用了一部分,还有几ul。那我将质粒重新转化DH5a,会改善这个情况么??? 两个方法哪个更有效?
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ctt1984

木虫 (正式写手)

初学者

【答案】应助回帖

★ ★
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小小八八: 金币+2 2015-10-18 15:57:24
可能是菌体退化了
重新转化一次就好。记得转化完后挑单菌落用15%甘油保存细菌放置于负70度冰箱,每次做挑一点出来直接摇菌即可。平板放在四度最多几周就不能用了。
好好做事,踏实做人!
20楼2015-10-17 13:56:39
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小小八八: 金币+2, 有帮助 2015-10-16 12:04:02
本帖内容被屏蔽

2楼2015-10-16 11:53:08
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小小八八

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Eternity宇 at 2015-10-16 11:53:08
重新转的话比较稳妥一点儿,因为不知道你摇菌的时间和Amp加的量所以不太敢确定是不是摇的问题……

都是过夜摇菌,amp终浓度都是一样的,我提质粒提了很多次了,操作都是一样的,应该不是摇菌的问题,那我重新转化的话我的质粒浓度能提高回来吗?好怕质粒浓度就上不去了那我后面酶切连接都没法做了,已经做了4个月酶切连接,一点进展都没有,这几次提质粒发现质粒浓度都上不去
3楼2015-10-16 12:03:48
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小小八八

铁虫 (初入文坛)

还想问一下,我如果用提出来的浓度50多的质粒还是说要用浓度170多的质粒重新转化的话我的质粒浓度能提高回来吗?哪个效果更好?好怕质粒浓度就上不去了那我后面酶切连接都没法做了,已经做了4个月酶切连接,一点进展都没有,这几次提质粒发现质粒浓度都上不去
4楼2015-10-16 12:05:43
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