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qingtingzhe银虫 (正式写手)
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质粒pETDuet-1的提取
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各位分子克隆高手： 我现在双基因共表达，pETDuet-1质粒很难提，连第一个基因的时候，提的浓度很低，但勉强可以用。但连完第一个基因后，再提取质粒每次都是失败。经过pCR验证里面是有那个质粒，但就是提不出来。我的条件如此：接种至有amp的LB培养基，过夜，菌液至浑浊，再加氯霉素四五个小时培养，增加拷贝数。加氯霉素前和氯霉素后的菌液中均提不出质粒。我试过分子克隆中的质粒中提和试剂盒的小量制备，效果均不好。下图中最最左面的三条带为我提取的pACYCDuet-1，最右面的两条带为我提取的pETDuet-1质粒。两个质粒同时提取的，为什么pETDuet-1在带有一个基因提不出来了？ 希望大家提出宝贵的建议！  |
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