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提取质粒和摇菌时候的问题。。。。。。。。。。 已有4人参与
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目的基因与表达载体连接后，挑取单菌落pcr鉴定正确，然后提取质粒酶切鉴定，但是菌液过夜培养一直不够浑浊（3ml接入400ul菌液），提取的质粒也不亮，酶切鉴定过一次，单双酶切结果一样，都是一条带，大小一样，我又将同管菌液，质粒PCR鉴定，目的条带也正确，不知道到底是什么原因？？？？？？哪位知道，跪求指点！ |
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myprayer: 金币+1, MolEPI+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-25 20:00:39
123q明: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-08-19 13:00:59
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123q明: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-08-19 13:00:59
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单双酶切只有一条带，应该有两种可能，一是酶切根本就没有切断，可能是酶切的效率不行，建议使用口碑较好的品牌；二是你目的片段的分子量较大，切下来的碎片段很小，所以看不到碎片段的条带，这要你自己分析一下是那种情况。 这里我还建议，你试试比较一下酶切后的条带大小和PCR鉴定的条带大小是不是差不多大，如果差不多大说明应该是酶切掉了。 你说的菌液不浓，我不知道你是用的多大的容器，多少体积的培养液摇的，反正有一点你要注意，液体在容器里摇的幅度必须不能太小，太小的话就等于根本没有要起来；另外要的时候一般是在37摄氏度，220 RPM的转速下摇，当然这个条件说的是大肠杆菌，其它菌可能有不同的条件吧。 就说这么多，希望对你有帮助！ |
10楼2015-07-25 09:56:43
董博士
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firthzhang
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a86052
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