应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取质粒和摇菌时候的问题。。。。。。。。。。
51/1返回列表
查看: 16606  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

123q明

金虫 (小有名气)

[求助] 提取质粒和摇菌时候的问题。。。。。。。。。。 已有4人参与

目的基因与表达载体连接后，挑取单菌落pcr鉴定正确，然后提取质粒酶切鉴定，但是菌液过夜培养一直不够浑浊（3ml接入400ul菌液），提取的质粒也不亮，酶切鉴定过一次，单双酶切结果一样，都是一条带，大小一样，我又将同管菌液，质粒PCR鉴定，目的条带也正确，不知道到底是什么原因？？？？？？哪位知道，跪求指点！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-07-23 23:42:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

firthzhang

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-25 19:59:26
123q明: 金币+3 2015-08-19 13:01:12
你先试试将抗生素的浓度降低，还有你说的3ml菌加400，是在指管里？你换用大瓶50ml的摇菌，空间太小，菌体不宜生长，37度，180转，提质粒用的菌不要超过12h，在提质粒时最好将母种放置冰上
赞一下(1人) 回复此楼
再出不来，我就去死！
3楼2015-07-24 11:20:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-25 19:59:32
123q明: 金币+2, ★有帮助 2015-08-19 13:01:22
单双酶切后条带大小如何，片段大小是多少，如果比较少，你的质粒本身就少，是不是太少看不到切下的片段？纯属猜测哈~可以送个测序
赞一下 回复此楼
2楼2015-07-24 09:34:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-25 20:00:28
就像3楼的建议，可以扩大培养试试，以前我也遇到过菌摇不起来，经常要16个小时才有浑浊，提取质粒浓度低，我的原因是因为我的慢病毒质粒太大了，将近1万bp，所以有人说质粒太大，菌就不好摇，后来扩大培养，做大提质粒，质粒浓度和纯度都还挺好的，不知道你的情况是不是和我一样
赞一下(2人) 回复此楼
医学&统计学
4楼2015-07-24 15:35:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猛兽

木虫 (小有名气)
做PCR时用水做对照，看引物是否污染了母的基因
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2015-07-25 09:19:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭