应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教Western-Blot的抗体选择方法？听说题目要长
51/1返回列表
查看: 1517  |  回复: 8
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiatianli888

金虫 (初入文坛)

[求助] 请教Western-Blot的抗体选择方法？听说题目要长已有1人参与

各位的大神，小妹最近准备做Western-Blot，但是抗体选择上有问题，我做的融合蛋白中仅是一个已有蛋白的结构域多肽，请问还能用原蛋白一抗么？如果不能，应该怎样订购这种结构域多肽的蛋白捏~多谢~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2015-07-16 08:45:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mmooseky

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以尝试在蛋白序列中分析挑选其中的几条相对您可能需要的肽段的短肽，每个短肽大概在15AA，去制备多抗
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xiatianli888
5楼2015-07-16 17:23:56
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

xiatianli888

金虫 (初入文坛)
顶啊顶，求大神

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
2楼2015-07-16 11:29:24
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
因为WB的一抗识别的蛋白质的表位是顺序表位，不是空间表位，所以WB状态下的抗原-抗体识别，与非变性的生理条件下的抗原-抗体识别不同。需要针对你的蛋白质或者多肽的序列表位制备单克隆抗体。
赞一下 回复此楼
3楼2015-07-16 12:53:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+5, 鼓励回帖交流 2015-07-16 14:42:48
多肽在溶液中的构象并不稳定，更要使用序列变位制备单克隆抗体。

α-Helix、β-sheet strand和 Random coil是三种最常见的出现在蛋白质-蛋白质相互作用或者蛋白质的亚基-蛋白质的亚基的缔合体之间的接触表面的二级结构。而且各种蛋白质之间或者亚基之间相互作用的接触表面的所有的氨基酸残基属于各种螺旋结构（包括α-Helix）的比例可能相当高，甚至在一些例子中会高达接近50%，β-sheet strand, Random coil占有氨基酸残基数量的百分比则大致为20%。当然对于不同的蛋白质之间或不同的亚基之间数值变化很大。对于多肽-蛋白质相互作用的接触表面的二级结构类型大致也是如此，可能各类二级结构的占有的氨基酸的比例会有些不同。所以我们需要简要的分析一下：多肽处于溶液状态时，其包含的α-Helix、β-sheet strand和 random coil这三种的典型的二级结构是否比较稳定，如果它们本身就不稳定，也就说明了多肽链溶液状态的二级结构是不稳定的，那么如此无论用多么先进的蛋白质结构预测软件和分子对接软件都无法得到唯一的计算模拟结果，因为这一结果本身就不存在。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xiatianli888
4楼2015-07-16 12:56:15
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭