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xiatianli888金虫 (初入文坛)
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请教Western-Blot的抗体选择方法？听说题目要长 已有1人参与
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| 各位的大神，小妹最近准备做Western-Blot，但是抗体选择上有问题，我做的融合蛋白中仅是一个已有蛋白的结构域多肽，请问还能用原蛋白一抗么？如果不能，应该怎样订购这种结构域多肽的蛋白捏~多谢~ |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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xiatianli888
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2楼2015-07-16 11:29:24
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+5, 鼓励回帖交流 2015-07-16 14:42:48
西门吹雪170: 金币+5, 鼓励回帖交流 2015-07-16 14:42:48
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多肽在溶液中的构象并不稳定，更要使用序列变位制备单克隆抗体。 α-Helix、β-sheet strand和 Random coil是三种最常见的出现在蛋白质-蛋白质相互作用或者蛋白质的亚基-蛋白质的亚基的缔合体之间的接触表面的二级结构。而且各种蛋白质之间或者亚基之间相互作用的接触表面的所有的氨基酸残基属于各种螺旋结构（包括α-Helix）的比例可能相当高，甚至在一些例子中会高达接近50%，β-sheet strand, Random coil占有氨基酸残基数量的百分比则大致为20%。当然对于不同的蛋白质之间或不同的亚基之间数值变化很大。对于多肽-蛋白质相互作用的接触表面的二级结构类型大致也是如此，可能各类二级结构的占有的氨基酸的比例会有些不同。所以我们需要简要的分析一下：多肽处于溶液状态时，其包含的α-Helix、β-sheet strand和 random coil这三种的典型的二级结构是否比较稳定，如果它们本身就不稳定，也就说明了多肽链溶液状态的二级结构是不稳定的，那么如此无论用多么先进的蛋白质结构预测软件和分子对接软件都无法得到唯一的计算模拟结果，因为这一结果本身就不存在。 |
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xiatianli8884楼2015-07-16 12:56:15
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
| 可以尝试在蛋白序列中分析挑选其中的几条相对您可能需要的肽段的短肽，每个短肽大概在15AA，去制备多抗 |
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5楼2015-07-16 17:23:56
xiatianli888
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xiatianli888: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-07-16 23:04:22
xiatianli888: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-07-16 23:04:22
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这个可是真不好说，要看具体的抗原表位是不是能不能形成，最起码要暴露在分子表面上，你可以用空间结构预测软件预测一下。 D. J. Rigden Edits, From Protein Structure to Function with Bioinformatics(2009) http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6382178&fpage=1&target=blank |
7楼2015-07-16 22:21:39
xiatianli888
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8楼2015-07-17 15:37:01
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9楼2015-09-19 15:19:50
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