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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » real-time PCR跑出来的图像很奇怪，求大神指导，我是新人第一次做这个，拜托拜托
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哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)

[求助] real-time PCR跑出来的图像很奇怪，求大神指导，我是新人第一次做这个，拜托拜托 已有5人参与

我用的是质粒模板，100ng-5ng的我都试过，几乎都是这样的图片，用的Taqman  MGB探针，引物终浓度300nM,探针200nM,求指导是什么情况

real-time PCR跑出来的图像很奇怪，求大神指导，我是新人第一次做这个，拜托拜托
308.jpg


real-time PCR跑出来的图像很奇怪，求大神指导，我是新人第一次做这个，拜托拜托-1
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real-time PCR跑出来的图像很奇怪，求大神指导，我是新人第一次做这个，拜托拜托-2
351.jpg
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啊
1楼 2015-07-09 12:52:07
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-13 23:13:56
你的模板太少了 或者是你的试剂有问题   几乎没有平台期 说明产物少 你看看你的时间是不是有问题  以及你的退火温度是不是过高
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生命不息奋斗不止
7楼2015-07-10 00:26:18
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
哎呀那个雨: 金币+5 2015-07-13 15:48:57
我用的就是ABI 7300系统  而且你的溶解曲线压根就没有  也说明你的产物是不存在的  综和以上分析  解决方案 1.检查试剂是否有问题  2.引物是不是压根那就错了 3.退火温度太高了 导致 扩增失败
赞一下(1人) 回复此楼
生命不息奋斗不止
8楼2015-07-10 00:28:55
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普通回帖

love_st

金虫 (著名写手)
没有扩增呗
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2楼2015-07-09 13:17:19
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许彦

木虫 (正式写手)
根本就没有扩增

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-07-09 14:41:52
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wsad5213

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-13 23:14:14
你跑的PCR程序有问题把，如果有扩增条带应该出现峰的，可能你加样的时候哪个环节出了问题，你可以用内参基因对比着做一下
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4楼2015-07-09 16:11:57
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vege的桌子

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
绝对是没有扩增，我做荧光定量，阴性对照就是这种情况
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5楼2015-07-09 21:19:57
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vincent_530

禁虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-13 23:14:34
本帖内容被屏蔽
6楼2015-07-09 22:05:58
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1314308002

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
qPCR条件要优化下，或者引物设计得不好
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9楼2015-07-12 10:22:23
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哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2015-07-10 00:26:18
你的模板太少了 或者是你的试剂有问题   几乎没有平台期 说明产物少 你看看你的时间是不是有问题  以及你的退火温度是不是过高

谢谢，确实是退火温度 高了，我尝试着把温度降低了p出来了
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啊
10楼2015-07-13 15:47:16
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