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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » real-time PCR跑出来的图像很奇怪，求大神指导，我是新人第一次做这个，拜托拜托
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哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)
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8楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2015-07-10 00:28:55
我用的就是ABI 7300系统  而且你的溶解曲线压根就没有  也说明你的产物是不存在的  综和以上分析  解决方案 1.检查试剂是否有问题  2.引物是不是压根那就错了 3.退火温度太高了 导致 扩增失败

我后来把退火温度降低了，P出来了，不过基线值很高，请问是什么原因呢
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啊
11楼2015-07-13 15:48:46
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哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wsad5213 at 2015-07-09 16:11:57
你跑的PCR程序有问题把，如果有扩增条带应该出现峰的，可能你加样的时候哪个环节出了问题，你可以用内参基因对比着做一下

谢谢，我做了常规PCR，发现是退火温度的问题
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啊
12楼2015-07-13 16:33:36
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 哎呀那个雨 at 2015-07-13 15:48:46
我后来把退火温度降低了，P出来了，不过基线值很高，请问是什么原因呢...

基线可以i手动调整  但是一般不建议这么做 你看看你的是线性图谱还是指数型图谱 2者是可以相互转换的  我记得指数型图谱的基线就比较高  线形图谱的基线是比较低的 其实结果都是一样  如果调整过后基线还是很高  你看看CT值是多少  如果 CT过大 那么就是模板浓度低
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生命不息奋斗不止
13楼2015-07-17 13:13:26
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哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)
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啊
14楼2015-07-23 20:55:02
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1322324659

新虫 (小有名气)
使用Taqman MGB探针进行基因突变的荧光定量检测，报告基团FAM，淬灭基团BHQ。
以10的7次方IU/ml质粒为模板，按1%~100%的比例稀释，但是曲线一直不成线性中间10%~20%这个比例的CT值一直比32%的小。
前后用了两个体系，一个自己配的，一个用的Taqman master mix。Taqman master mix曲线很好看，有按比例来，但是产物一直不多。自己配的就是上面说问题，由于实验需要，我只能用自己配的体系。

求前辈指导！！
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15楼2015-10-23 11:01:28
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1322324659

新虫 (小有名气)
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16楼2015-10-23 11:01:38
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1322324659

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2015-07-17 13:13:26
基线可以i手动调整  但是一般不建议这么做 你看看你的是线性图谱还是指数型图谱 2者是可以相互转换的  我记得指数型图谱的基线就比较高  线形图谱的基线是比较低的 其实结果都是一样  如果调整过后基线还是很高  你 ...

使用Taqman MGB探针进行基因突变的荧光定量检测，报告基团FAM，淬灭基团BHQ。
以10的7次方IU/ml质粒为模板，按1%~100%的比例稀释，但是曲线一直不成线性中间10%~20%这个比例的CT值一直比32%的小。
前后用了两个体系，一个自己配的，一个用的Taqman master mix。Taqman master mix曲线很好看，有按比例来，但是产物一直不多。自己配的就是上面说问题，由于实验需要，我只能用自己配的体系。

求前辈指导！！
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17楼2015-10-23 11:02:03
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
你好，请教你一个问题，探针法q-pcr中，探针3‘端有淬灭集团，我最近找公司合成的探针我要求3’端为MGB基团，但是他合成的是BHQ基团，我问公司，他们说只是每个公司的叫法不一样，原料是一样的，你这方面了解吗？
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18楼2016-05-31 16:10:12
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