应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » real-time PCR跑出来的图像很奇怪，求大神指导，我是新人第一次做这个，拜托拜托
182/2返回列表上一页12
查看: 1954  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2015-07-10 00:28:55
我用的就是ABI 7300系统  而且你的溶解曲线压根就没有  也说明你的产物是不存在的  综和以上分析  解决方案 1.检查试剂是否有问题  2.引物是不是压根那就错了 3.退火温度太高了 导致 扩增失败

我后来把退火温度降低了，P出来了，不过基线值很高，请问是什么原因呢
赞一下 回复此楼
啊
11楼2015-07-13 15:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wsad5213 at 2015-07-09 16:11:57
你跑的PCR程序有问题把，如果有扩增条带应该出现峰的，可能你加样的时候哪个环节出了问题，你可以用内参基因对比着做一下

谢谢，我做了常规PCR，发现是退火温度的问题
赞一下 回复此楼
啊
12楼2015-07-13 16:33:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 哎呀那个雨 at 2015-07-13 15:48:46
我后来把退火温度降低了，P出来了，不过基线值很高，请问是什么原因呢...

基线可以i手动调整  但是一般不建议这么做 你看看你的是线性图谱还是指数型图谱 2者是可以相互转换的  我记得指数型图谱的基线就比较高  线形图谱的基线是比较低的 其实结果都是一样  如果调整过后基线还是很高  你看看CT值是多少  如果 CT过大 那么就是模板浓度低
赞一下 回复此楼
生命不息奋斗不止
13楼2015-07-17 13:13:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)
内容已删除
回复此楼
啊
14楼2015-07-23 20:55:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1322324659

新虫 (小有名气)
使用Taqman MGB探针进行基因突变的荧光定量检测，报告基团FAM，淬灭基团BHQ。
以10的7次方IU/ml质粒为模板，按1%~100%的比例稀释，但是曲线一直不成线性中间10%~20%这个比例的CT值一直比32%的小。
前后用了两个体系，一个自己配的，一个用的Taqman master mix。Taqman master mix曲线很好看，有按比例来，但是产物一直不多。自己配的就是上面说问题，由于实验需要，我只能用自己配的体系。

求前辈指导！！
赞一下 回复此楼
15楼2015-10-23 11:01:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1322324659

新虫 (小有名气)
内容已删除
回复此楼
16楼2015-10-23 11:01:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1322324659

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2015-07-17 13:13:26
基线可以i手动调整  但是一般不建议这么做 你看看你的是线性图谱还是指数型图谱 2者是可以相互转换的  我记得指数型图谱的基线就比较高  线形图谱的基线是比较低的 其实结果都是一样  如果调整过后基线还是很高  你 ...

使用Taqman MGB探针进行基因突变的荧光定量检测，报告基团FAM，淬灭基团BHQ。
以10的7次方IU/ml质粒为模板，按1%~100%的比例稀释，但是曲线一直不成线性中间10%~20%这个比例的CT值一直比32%的小。
前后用了两个体系，一个自己配的，一个用的Taqman master mix。Taqman master mix曲线很好看，有按比例来，但是产物一直不多。自己配的就是上面说问题，由于实验需要，我只能用自己配的体系。

求前辈指导！！
赞一下 回复此楼
17楼2015-10-23 11:02:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨仔儿

木虫 (著名写手)
你好，请教你一个问题，探针法q-pcr中，探针3‘端有淬灭集团，我最近找公司合成的探针我要求3’端为MGB基团，但是他合成的是BHQ基团，我问公司，他们说只是每个公司的叫法不一样，原料是一样的，你这方面了解吗？
赞一下 回复此楼
18楼2016-05-31 16:10:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 哎呀那个雨 的主题更新
182/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:25 by mibUvS8DDCwf
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:21 by mibUvS8DDCwf
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:21 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:24 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:01 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:24 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-14 21:21 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:48 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-14 15:21 by Aj1rhIDL5ixY
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[基金申请] 面上有专家说实验设备不是我们单位的 +6 zj_muchong 2026-09-08 8/400 2026-09-11 06:56 by suifengdao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭