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哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)

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虫号: 2672153
注册: 2013-09-22
性别: MM
专业: 病毒学

[求助] real-time PCR跑出来的图像很奇怪，求大神指导，我是新人第一次做这个，拜托拜托已有5人参与

我用的是质粒模板，100ng-5ng的我都试过，几乎都是这样的图片，用的Taqman MGB探针，引物终浓度300nM,探针200nM,求指导是什么情况

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real-time PCR跑出来的图像很奇怪，求大神指导，我是新人第一次做这个，拜托拜托-1

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real-time PCR跑出来的图像很奇怪，求大神指导，我是新人第一次做这个，拜托拜托-2

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啊

1楼 2015-07-09 12:52:07

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1322324659

新虫 (小有名气)

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注册: 2015-03-04
专业: 临床微生物学检验

使用Taqman MGB探针进行基因突变的荧光定量检测，报告基团FAM，淬灭基团BHQ。
以10的7次方IU/ml质粒为模板，按1%~100%的比例稀释，但是曲线一直不成线性中间10%~20%这个比例的CT值一直比32%的小。
前后用了两个体系，一个自己配的，一个用的Taqman master mix。Taqman master mix曲线很好看，有按比例来，但是产物一直不多。自己配的就是上面说问题，由于实验需要，我只能用自己配的体系。

求前辈指导！！