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以基因组DNA为模板设计引物
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大家好，我对引物设计方面不怎么懂，想问大家我该怎么设计引物？先附上我的人EGFR基因组序列的一部分如下：为了方便大家看，中间一段用小写字母表示的是外显子部分，小写中的20个大写表示我突变想检测的部分其余大写字体都是内含子部分。因为我做的是crisprs-cas方面的，小写中的大写部分是我设计的oligoDNA（实际上也是基因组DNA的一部分）, 与cas9载体连接后转染到细胞，能够与细胞基因组结合，发生定点突变，我现在要以基因组DNA为模板设计引物，看小写字体中大写的那部分有没有发生变化。我想问以基因组DNA为模板设计引物时是不是不考虑什么内含子，直接根据模板设计就可以了？非长感谢大家能够积极献策AAAAGTTCATTATATAGTTATTAACTCAACCCTACAGTTATATTCGTGAAATACCTTGTGAAATTTATTTTTTGCCTACTGGAGCTCTTACAGGTTAATCCTGTCTTCAAGATTTTCATAGAATTTTCATCTACCACCCACCCCTTTAAATTTCAACATTTTTTTATTTTGGCATTTTAATGCAATTCAATGCATTATAGGGACAAGCTATCTCTTATTATGAATTGCACCTTATATAAACTTAAAGATCTTTTATCACAAATTTCTTTGCTGTGTCCTTTAGTGAGAATTTGTATTATCAGTCACTAAAGCTCACTAAGTTAGTAAGCTTTGCGCCCAGATGACCTGGGCAGGAATGGGTGAGTCTCTGTGTGGAGAGAGTGAAGAAACTGCTACCCTTAATACCTGGACCTTGAGGGATTGTTTTATTTTAGTTTTTCTGCATTTCTCAGTATTTCATGTGATATCTGTCTTTTTCTTCCAG tttgccaaggcacgAGTAACAAGCTCACGCAGTTgggcacttttgaagatcattttctcagcctccagaggatgttcaataactgtgaggtggtccttgggaatttggaaattacctatgtgcagaggaattatgatctttccttcttaaag GTTGGTGACTTTGATTTTCCTACACAAATAAAATTGGAGAAAATCTAAGTGGAGAAAGGCCTGGGCAGAATTCCACTTGAAGTGTGTTTATTTTTGCTATGGCAATGACAAGTCTTACAGAGCTACAAACGAGAGTTTTATGAGAAAGCCATTTTACCAGCTAATGTCAAGTAATAACTAGAAAAGGATATCAAATAGAAACAGGCTAATCTGGAGTTCCATGTCATCATAGACACTGACGTTTATCCCTGACCATTACCTCAGTCATGATGTGCTGCCATACTCGCTCTTAAAAACTTTTTTTAAAAGCCCTGCTTTGCACCATTTGCCTATTCCCTTAGTGTAAATACTCCTACTATAGCTGATTTCAAGGTACCAAGTTTC |
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