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jshysunjx

新虫 (初入文坛)

[求助] 以基因组DNA为模板设计引物

大家好,我对引物设计方面不怎么懂,想问大家我该怎么设计引物?先附上我的人EGFR基因组序列的一部分如下:为了方便大家看,中间一段用小写字母表示的是外显子部分,小写中的20个大写表示我突变想检测的部分其余大写字体都是内含子部分。因为我做的是crisprs-cas方面的,小写中的大写部分是我设计的oligoDNA(实际上也是基因组DNA的一部分), 与cas9载体连接后转染到细胞,能够与细胞基因组结合,发生定点突变,我现在要以基因组DNA为模板设计引物,看小写字体中大写的那部分有没有发生变化。我想问以基因组DNA为模板设计引物时是不是不考虑什么内含子,直接根据模板设计就可以了?非长感谢大家能够积极献策AAAAGTTCATTATATAGTTATTAACTCAACCCTACAGTTATATTCGTGAAATACCTTGTGAAATTTATTTTTTGCCTACTGGAGCTCTTACAGGTTAATCCTGTCTTCAAGATTTTCATAGAATTTTCATCTACCACCCACCCCTTTAAATTTCAACATTTTTTTATTTTGGCATTTTAATGCAATTCAATGCATTATAGGGACAAGCTATCTCTTATTATGAATTGCACCTTATATAAACTTAAAGATCTTTTATCACAAATTTCTTTGCTGTGTCCTTTAGTGAGAATTTGTATTATCAGTCACTAAAGCTCACTAAGTTAGTAAGCTTTGCGCCCAGATGACCTGGGCAGGAATGGGTGAGTCTCTGTGTGGAGAGAGTGAAGAAACTGCTACCCTTAATACCTGGACCTTGAGGGATTGTTTTATTTTAGTTTTTCTGCATTTCTCAGTATTTCATGTGATATCTGTCTTTTTCTTCCAG

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