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nieqiantina

银虫 (初入文坛)

[求助] 请教，当扩出来的PCR产物很短(比如只有30bp）的时候，应该怎么办已有14人参与

请教，当扩出来的PCR产物很短(比如只有30bp）的时候，应该怎么办
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1楼2015-07-06 09:15:29
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是要合成吗？直接双引物退火就行了，不需要PCR
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9楼2015-07-06 13:24:44
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nonglong1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
短序列构建T载体后再测序

[ 发自小木虫客户端 ]
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植物学
16楼2015-07-06 14:52:28
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
nieqiantina(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-08 09:24:57
你想干嘛？只是验证有没有的话，10%page 应该可以，如果要插入到载体质粒上，要看你选择什么方法，酶切连接，还是别的什么
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6楼2015-07-06 10:55:01
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

30几bp直接测序是没办法，可以考虑将其导入到T载体里，然后再测序重组T载体即可，具体方法，你可以上网找一下takara官网应该有。
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18楼2015-07-06 17:21:35
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
25楼: Originally posted by junhu886 at 2015-07-07 09:38:17
如果只是为了测序，可以扩增长一点，只要目的片段在里面就可以
如果只是为了P出目的片段，可以用特殊的PCR方法，分子克隆指南上应该有

扩增长一点是设计引物时把模板增加吗，还是其他什么办法，请指教
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29楼2015-07-07 11:14:19
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普通回帖

nieqiantina

银虫 (初入文坛)
坐等
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2楼2015-07-06 09:16:15
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)
有哪位大神知道，帮帮忙
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3楼2015-07-06 09:21:58
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)
求大神指导
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4楼2015-07-06 09:30:52
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)
等等等等等等等等等等等等等等等等
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5楼2015-07-06 09:52:51
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ksws0465326 at 2015-07-06 10:55:01
你想干嘛？只是验证有没有的话，10%page 应该可以，如果要插入到载体质粒上，要看你选择什么方法，酶切连接，还是别的什么

就是为了测序，可是片段太短，测不出来
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7楼2015-07-06 11:19:12
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
那是目的条带吗？不会是引物二聚体吧。
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8楼2015-07-06 13:02:35
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huangglen

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
nieqiantina(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-08 09:25:07
楼主预期产物是这么大吗？如果是预期比较大的产物，电泳跑出这样的位置，那可能是引物二聚体，pcr未成功扩增

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2015-07-06 14:12:43
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