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nieqiantina

银虫 (初入文坛)

[求助] 请教,当扩出来的PCR产物很短(比如只有30bp)的时候,应该怎么办 已有14人参与

请教,当扩出来的PCR产物很短(比如只有30bp)的时候,应该怎么办
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是要合成吗?直接双引物退火就行了,不需要PCR
9楼2015-07-06 13:24:44
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nonglong1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
短序列构建T载体后再测序

[ 发自小木虫客户端 ]
植物学
16楼2015-07-06 14:52:28
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
nieqiantina(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-08 09:24:57
你想干嘛?只是验证有没有的话,10%page 应该可以,如果要插入到载体质粒上,要看你选择什么方法,酶切连接,还是别的什么
6楼2015-07-06 10:55:01
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

30几bp直接测序是没办法,可以考虑将其导入到T载体里,然后再测序重组T载体即可,具体方法,你可以上网找一下takara官网应该有。
18楼2015-07-06 17:21:35
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
25楼: Originally posted by junhu886 at 2015-07-07 09:38:17
如果只是为了测序,可以扩增长一点,只要目的片段在里面就可以
如果只是为了P出目的片段,可以用特殊的PCR方法,分子克隆指南上应该有

扩增长一点是设计引物时把模板增加吗,还是其他什么办法,请指教
29楼2015-07-07 11:14:19
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普通回帖

nieqiantina

银虫 (初入文坛)

2楼2015-07-06 09:16:15
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)

有哪位大神知道,帮帮忙
3楼2015-07-06 09:21:58
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)

求大神指导
4楼2015-07-06 09:30:52
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)

等等等等等等等等等等等等等等等等
5楼2015-07-06 09:52:51
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ksws0465326 at 2015-07-06 10:55:01
你想干嘛?只是验证有没有的话,10%page 应该可以,如果要插入到载体质粒上,要看你选择什么方法,酶切连接,还是别的什么

就是为了测序,可是片段太短,测不出来
7楼2015-07-06 11:19:12
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那是目的条带吗?不会是引物二聚体吧。
123456
8楼2015-07-06 13:02:35
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huangglen

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
nieqiantina(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-08 09:25:07
楼主预期产物是这么大吗?如果是预期比较大的产物,电泳跑出这样的位置,那可能是引物二聚体,pcr未成功扩增

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
10楼2015-07-06 14:12:43
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