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nieqiantina

银虫 (初入文坛)

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17楼: Originally posted by xujian568 at 2015-07-06 16:41:46
1,正反向引物退火,连接载体测序
2,直接按载体设计30+或者15+/15+正反引物,磷酸化后自连测序

没太明白意思,能说明白一点吗,谢谢

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21楼2015-07-06 19:49:39
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jackyoung

新虫 (正式写手)

30bp还括增测序?确定不用加接头?小RNA么?

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CestLaVie
22楼2015-07-06 19:56:00
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LuM_QD

金虫 (正式写手)

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7楼: Originally posted by nieqiantina at 2015-07-06 11:19:12
就是为了测序,可是片段太短,测不出来...

前后的序列知道吗?引物往外边设计一下,pcr后再测序就行了啊

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呵呵
23楼2015-07-06 20:19:53
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b6122

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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7楼: Originally posted by nieqiantina at 2015-07-05 22:19:12
就是为了测序,可是片段太短,测不出来...

TA克隆或者连入你自己的载体然后测序。还有,你问问题应该问清楚。360bp的pcr产物也不是什么稀奇东西,你问个怎么办别人怎么知道怎么办。
24楼2015-07-07 02:18:47
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junhu886

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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nieqiantina(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-08 09:26:09
如果只是为了测序,可以扩增长一点,只要目的片段在里面就可以
如果只是为了P出目的片段,可以用特殊的PCR方法,分子克隆指南上应该有
25楼2015-07-07 09:38:17
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ppppppppp

新虫 (小有名气)

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用荧光探针。探针让公司合成,实在不行就用这个方法吧。
初来乍到,请多指教
26楼2015-07-07 10:29:16
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易水秋寒

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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目的条带纯化后连接T载体,然后用通用引物测序,通用引物之间长度也有150bp左右呢。
27楼2015-07-07 11:11:38
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
23楼: Originally posted by LuM_QD at 2015-07-06 20:19:53
前后的序列知道吗?引物往外边设计一下,pcr后再测序就行了啊
...

引物往外边设置是增加引物长度吗,那有什么要求和原则,还是规定的序列
28楼2015-07-07 11:12:56
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
25楼: Originally posted by junhu886 at 2015-07-07 09:38:17
如果只是为了测序,可以扩增长一点,只要目的片段在里面就可以
如果只是为了P出目的片段,可以用特殊的PCR方法,分子克隆指南上应该有

扩增长一点是设计引物时把模板增加吗,还是其他什么办法,请指教
29楼2015-07-07 11:14:19
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
24楼: Originally posted by b6122 at 2015-07-07 02:18:47
TA克隆或者连入你自己的载体然后测序。还有,你问问题应该问清楚。360bp的pcr产物也不是什么稀奇东西,你问个怎么办别人怎么知道怎么办。...

我问的是30bp
30楼2015-07-07 17:30:47
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