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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请教，当扩出来的PCR产物很短(比如只有30bp）的时候，应该怎么办
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by xujian568 at 2015-07-06 16:41:46
1，正反向引物退火，连接载体测序
2，直接按载体设计30+或者15+／15+正反引物，磷酸化后自连测序

没太明白意思，能说明白一点吗，谢谢

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21楼2015-07-06 19:49:39
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jackyoung

新虫 (正式写手)
30bp还括增测序？确定不用加接头？小RNA么？

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CestLaVie
22楼2015-07-06 19:56:00
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LuM_QD

金虫 (正式写手)

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7楼: Originally posted by nieqiantina at 2015-07-06 11:19:12
就是为了测序，可是片段太短，测不出来...

前后的序列知道吗？引物往外边设计一下，pcr后再测序就行了啊

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呵呵
23楼2015-07-06 20:19:53
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b6122

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
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7楼: Originally posted by nieqiantina at 2015-07-05 22:19:12
就是为了测序，可是片段太短，测不出来...

TA克隆或者连入你自己的载体然后测序。还有，你问问题应该问清楚。360bp的pcr产物也不是什么稀奇东西，你问个怎么办别人怎么知道怎么办。
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24楼2015-07-07 02:18:47
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junhu886

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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nieqiantina(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-08 09:26:09
如果只是为了测序，可以扩增长一点，只要目的片段在里面就可以
如果只是为了P出目的片段，可以用特殊的PCR方法，分子克隆指南上应该有
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25楼2015-07-07 09:38:17
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ppppppppp

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用荧光探针。探针让公司合成，实在不行就用这个方法吧。
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初来乍到，请多指教
26楼2015-07-07 10:29:16
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易水秋寒

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
目的条带纯化后连接T载体，然后用通用引物测序，通用引物之间长度也有150bp左右呢。
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27楼2015-07-07 11:11:38
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
23楼: Originally posted by LuM_QD at 2015-07-06 20:19:53
前后的序列知道吗？引物往外边设计一下，pcr后再测序就行了啊
...

引物往外边设置是增加引物长度吗，那有什么要求和原则，还是规定的序列
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28楼2015-07-07 11:12:56
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
25楼: Originally posted by junhu886 at 2015-07-07 09:38:17
如果只是为了测序，可以扩增长一点，只要目的片段在里面就可以
如果只是为了P出目的片段，可以用特殊的PCR方法，分子克隆指南上应该有

扩增长一点是设计引物时把模板增加吗，还是其他什么办法，请指教
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29楼2015-07-07 11:14:19
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
24楼: Originally posted by b6122 at 2015-07-07 02:18:47
TA克隆或者连入你自己的载体然后测序。还有，你问问题应该问清楚。360bp的pcr产物也不是什么稀奇东西，你问个怎么办别人怎么知道怎么办。...

我问的是30bp
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30楼2015-07-07 17:30:47
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