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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请教，当扩出来的PCR产物很短(比如只有30bp）的时候，应该怎么办
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by huangglen at 2015-07-06 14:12:43
楼主预期产物是这么大吗？如果是预期比较大的产物，电泳跑出这样的位置，那可能是引物二聚体，pcr未成功扩增

预期产物就是这么大
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11楼2015-07-06 14:21:21
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lifechuteng at 2015-07-06 13:24:44
你是要合成吗？直接双引物退火就行了，不需要PCR

双引物退火会合成目的条带吗
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12楼2015-07-06 14:22:02
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jiqinger at 2015-07-06 13:02:35
那是目的条带吗？不会是引物二聚体吧。

预期产物PCR条带就是这么短，就是想找出一个解决方法
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13楼2015-07-06 14:22:39
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jiqinger at 2015-07-06 13:02:35
那是目的条带吗？不会是引物二聚体吧。

就是目的条带，当它太短的时候，寻求一个解决方法
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14楼2015-07-06 14:30:53
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lifechuteng at 2015-07-06 13:24:44
你是要合成吗？直接双引物退火就行了，不需要PCR

主要问题是合成之后的测序，因其太短，怎么解决
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15楼2015-07-06 14:31:32
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nonglong1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
短序列构建T载体后再测序

[ 发自小木虫客户端 ]
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植物学
16楼2015-07-06 14:52:28
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
nieqiantina(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-08 09:25:21
1，正反向引物退火，连接载体测序
2，直接按载体设计30+或者15+／15+正反引物，磷酸化后自连测序
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活着就要让人感受到你的存在。
17楼2015-07-06 16:41:46
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

30几bp直接测序是没办法，可以考虑将其导入到T载体里，然后再测序重组T载体即可，具体方法，你可以上网找一下takara官网应该有。
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18楼2015-07-06 17:21:35
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
直接合成

[ 发自小木虫客户端 ]
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19楼2015-07-06 17:37:32
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thaw

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
取决于你想干啥，肯定有更简洁的办法，可以私信我，不是公司不收费
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20楼2015-07-06 18:02:22
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