应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 免疫染色中的固定问题
61/1返回列表
查看: 1518  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

child2012

新虫 (小有名气)

[求助] 免疫染色中的固定问题

刚刚接触免疫染色，总是染不上颜色，大家给看看是什么原因：1 染色的组织（很小）在活体内非常软，即使剖出来形态也不好易扭曲，所以，我都是先用多聚甲醛固定1h-3h，固定完后，组织变硬，形态也特别好看。所以我想问的是，固定后的组织是否交联程度较强，从而把 抗原封闭而导致不能染上色的？看到有人说要抗原修复，如果用高温修复，那么蛋白质不是变性了吗？变性后的抗原还能跟抗体结合吗？2 在加入1抗和2抗反应时，应该在低温还是高温反应呢？抗体一般保存在低温中，如果高温会不会也变性呢，从而不能结合乃至染色？请各位虫友指教。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
changemyself,changelife.
1楼 2015-06-18 10:13:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HTweiyi

银虫 (小有名气)
你好,你这个问题我给你讲下,你的组织是石蜡切片,还是冰冻切片,不同的切片,对组织的损伤是不一样的,如果是石蜡的话,需要做修复的.至于多聚甲醛固定的话,时间长的话会产生影响的,一般室温固定20-30分钟就差不多了,至于抗体话,一般最高也就是37度下孵育
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-06-29 14:09:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mutant

铁虫 (小有名气)
我认为蛋白变性跟抗体与抗原结合没有关系，抗体和是抗原上的决定簇结合的，所以不最好修复一下，让他暴露出来
赞一下 回复此楼
3楼2015-06-29 18:07:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

child2012

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-06-29 14:09:00
你好,你这个问题我给你讲下,你的组织是石蜡切片,还是冰冻切片,不同的切片,对组织的损伤是不一样的,如果是石蜡的话,需要做修复的.至于多聚甲醛固定的话,时间长的话会产生影响的,一般室温固定20-30分钟就差不多了,至于 ...

应该属于冷冻切片，另外我也做整体的染色，之前我试过固定时间比较短的，30min、1h、2h 、3h等 结果却发现都没有染上色，而之前固定过夜的有染上色的。所以我又在思考是不是 抗原弥散了，或者是时间太长导致的。
赞一下 回复此楼
changemyself,changelife.
4楼2015-06-30 20:40:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

child2012

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mutant at 2015-06-29 18:07:17
我认为蛋白变性跟抗体与抗原结合没有关系，抗体和是抗原上的决定簇结合的，所以不最好修复一下，让他暴露出来

最好修复吗？我也要高温修复试一下。谢谢。
赞一下 回复此楼
changemyself,changelife.
5楼2015-06-30 21:39:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

奔跑吧蛋白

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-06-29 14:09:00
你好,你这个问题我给你讲下,你的组织是石蜡切片,还是冰冻切片,不同的切片,对组织的损伤是不一样的,如果是石蜡的话,需要做修复的.至于多聚甲醛固定的话,时间长的话会产生影响的,一般室温固定20-30分钟就差不多了,至于 ...

请教一下，我想做冰冻切片，多聚甲醛固定后组织形态会比较好，但是会不会封闭抗原呢，不想做抗原修复

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-11-11 14:25:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 child2012 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +19 Lanmanbaby 2026-08-09 32/1600 2026-08-12 09:56 by gltch
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +5 Tide man 2026-08-11 5/250 2026-08-12 09:24 by kangban
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 17/850 2026-08-11 10:50 by 要乐观耀哥
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭