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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 间接免疫荧光定位染色步骤中甲醇的作用
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suijinkai

木虫 (小有名气)

[求助] 间接免疫荧光定位染色步骤中甲醇的作用 已有3人参与

我做植物微管的免疫荧光定位，材料固定和细胞壁酶解后，有一步要用甲醇-20℃处理10 min，请教专家这一步的作用是什么？
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1楼 2014-03-17 10:57:12
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lidongxia

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-03-20 14:33:43
suijinkai: 金币+8, ★★★很有帮助 2014-09-04 16:45:48
甲醇是脂溶性的固定液，可以破坏细胞的脂质双层体，这样更有利于抗体进入内与相关的抗原结合了。
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2楼2014-03-17 13:37:05
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suijinkai

木虫 (小有名气)
★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-03-20 14:33:52
引用回帖:
2楼: Originally posted by lidongxia at 2014-03-17 13:37:05
甲醇是脂溶性的固定液，可以破坏细胞的脂质双层体，这样更有利于抗体进入内与相关的抗原结合了。

不好意思，可能是我没表述清楚，我第一步是用甲醛和戊二醛固定，然后是酶解，第三步才用到甲醇，加一抗前一步用triton透化。我这个步骤比较繁琐，是从2010年的一篇文献上学的。所以是前面有固定，后面有透化，中间这个甲醇把我搞蒙了。
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3楼2014-03-17 15:19:25
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lidongxia

铁虫 (初入文坛)
★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-03-20 14:33:59
引用回帖:
3楼: Originally posted by suijinkai at 2014-03-17 15:19:25
不好意思，可能是我没表述清楚，我第一步是用甲醛和戊二醛固定，然后是酶解，第三步才用到甲醇，加一抗前一步用triton透化。我这个步骤比较繁琐，是从2010年的一篇文献上学的。所以是前面有固定，后面有透化，中间 ...

这样也不矛盾呀，再中间加一步甲醇的处理，主要的作用是兼顾固定和透膜，我之前做过一个细胞免疫荧光实验，也是需要固定和通透，没加甲醇效果不好，加了之后效果不错。你可以试一下加与不加做个对比，如果不加也没什么影响可以不要这一步。
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4楼2014-03-20 13:16:06
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一个蜗牛壳

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

最近也想做微管的染色，问一下你用的是什么抗体？植物细胞核动物细胞的抗体是一样的吗？
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5楼2014-04-30 11:14:45
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ahhngwj

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
suijinkai: 金币+2, ★有帮助 2014-09-04 16:46:06
甲醇可有效去除植物细胞中的自发荧光。而且，它可以通透细胞膜
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6楼2014-07-22 21:08:44
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suijinkai

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ahhngwj at 2014-07-22 21:08:44
甲醇可有效去除植物细胞中的自发荧光。而且，它可以通透细胞膜

好像可以去叶绿素之类的色素，自发荧光能去吗？有没有依据？我去自发荧光用的是硼氢化钠。
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7楼2014-09-04 16:47:19
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suijinkai

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 一个蜗牛壳 at 2014-04-30 11:14:45
最近也想做微管的染色，问一下你用的是什么抗体？植物细胞核动物细胞的抗体是一样的吗？

我了解的不多，植物抗体好像比较少，动物的很多，但是细胞骨架之类的动植物共有且保守性比较高的蛋白，也可以用动物的抗体，我用的是sigma的T6199和T4026。回的晚了，不好意思。
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8楼2014-09-04 16:52:37
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ahhngwj

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by suijinkai at 2014-09-04 16:47:19
好像可以去叶绿素之类的色素，自发荧光能去吗？有没有依据？我去自发荧光用的是硼氢化钠。...

甲醇可以去叶绿素的
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9楼2014-09-04 20:51:30
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