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suijinkai

木虫 (小有名气)

[求助] 间接免疫荧光定位染色步骤中甲醇的作用 已有3人参与

我做植物微管的免疫荧光定位,材料固定和细胞壁酶解后,有一步要用甲醇-20℃处理10 min,请教专家这一步的作用是什么?
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一个蜗牛壳

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

最近也想做微管的染色,问一下你用的是什么抗体?植物细胞核动物细胞的抗体是一样的吗?
5楼2014-04-30 11:14:45
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lidongxia

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-03-20 14:33:43
suijinkai: 金币+8, ★★★很有帮助 2014-09-04 16:45:48
甲醇是脂溶性的固定液,可以破坏细胞的脂质双层体,这样更有利于抗体进入内与相关的抗原结合了。
时间会给你一切你想要的答案
2楼2014-03-17 13:37:05
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suijinkai

木虫 (小有名气)


137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-03-20 14:33:52
引用回帖:
2楼: Originally posted by lidongxia at 2014-03-17 13:37:05
甲醇是脂溶性的固定液,可以破坏细胞的脂质双层体,这样更有利于抗体进入内与相关的抗原结合了。

不好意思,可能是我没表述清楚,我第一步是用甲醛和戊二醛固定,然后是酶解,第三步才用到甲醇,加一抗前一步用triton透化。我这个步骤比较繁琐,是从2010年的一篇文献上学的。所以是前面有固定,后面有透化,中间这个甲醇把我搞蒙了。
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3楼2014-03-17 15:19:25
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lidongxia

铁虫 (初入文坛)


137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-03-20 14:33:59
引用回帖:
3楼: Originally posted by suijinkai at 2014-03-17 15:19:25
不好意思,可能是我没表述清楚,我第一步是用甲醛和戊二醛固定,然后是酶解,第三步才用到甲醇,加一抗前一步用triton透化。我这个步骤比较繁琐,是从2010年的一篇文献上学的。所以是前面有固定,后面有透化,中间 ...

这样也不矛盾呀,再中间加一步甲醇的处理,主要的作用是兼顾固定和透膜,我之前做过一个细胞免疫荧光实验,也是需要固定和通透,没加甲醇效果不好,加了之后效果不错。你可以试一下加与不加做个对比,如果不加也没什么影响可以不要这一步。
时间会给你一切你想要的答案
4楼2014-03-20 13:16:06
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