24小时热门版块排行榜    

查看: 2983  |  回复: 8

suijinkai

木虫 (小有名气)

[求助] 间接免疫荧光定位染色步骤中甲醇的作用 已有3人参与

我做植物微管的免疫荧光定位,材料固定和细胞壁酶解后,有一步要用甲醇-20℃处理10 min,请教专家这一步的作用是什么?
回复此楼
机会只给有准备的人!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidongxia

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-03-20 14:33:43
suijinkai: 金币+8, ★★★很有帮助 2014-09-04 16:45:48
甲醇是脂溶性的固定液,可以破坏细胞的脂质双层体,这样更有利于抗体进入内与相关的抗原结合了。
时间会给你一切你想要的答案
2楼2014-03-17 13:37:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

suijinkai

木虫 (小有名气)


137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-03-20 14:33:52
引用回帖:
2楼: Originally posted by lidongxia at 2014-03-17 13:37:05
甲醇是脂溶性的固定液,可以破坏细胞的脂质双层体,这样更有利于抗体进入内与相关的抗原结合了。

不好意思,可能是我没表述清楚,我第一步是用甲醛和戊二醛固定,然后是酶解,第三步才用到甲醇,加一抗前一步用triton透化。我这个步骤比较繁琐,是从2010年的一篇文献上学的。所以是前面有固定,后面有透化,中间这个甲醇把我搞蒙了。
机会只给有准备的人!
3楼2014-03-17 15:19:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidongxia

铁虫 (初入文坛)


137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-03-20 14:33:59
引用回帖:
3楼: Originally posted by suijinkai at 2014-03-17 15:19:25
不好意思,可能是我没表述清楚,我第一步是用甲醛和戊二醛固定,然后是酶解,第三步才用到甲醇,加一抗前一步用triton透化。我这个步骤比较繁琐,是从2010年的一篇文献上学的。所以是前面有固定,后面有透化,中间 ...

这样也不矛盾呀,再中间加一步甲醇的处理,主要的作用是兼顾固定和透膜,我之前做过一个细胞免疫荧光实验,也是需要固定和通透,没加甲醇效果不好,加了之后效果不错。你可以试一下加与不加做个对比,如果不加也没什么影响可以不要这一步。
时间会给你一切你想要的答案
4楼2014-03-20 13:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一个蜗牛壳

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

最近也想做微管的染色,问一下你用的是什么抗体?植物细胞核动物细胞的抗体是一样的吗?
5楼2014-04-30 11:14:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ahhngwj

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
suijinkai: 金币+2, 有帮助 2014-09-04 16:46:06
甲醇可有效去除植物细胞中的自发荧光。而且,它可以通透细胞膜
6楼2014-07-22 21:08:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

suijinkai

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ahhngwj at 2014-07-22 21:08:44
甲醇可有效去除植物细胞中的自发荧光。而且,它可以通透细胞膜

好像可以去叶绿素之类的色素,自发荧光能去吗?有没有依据?我去自发荧光用的是硼氢化钠。
机会只给有准备的人!
7楼2014-09-04 16:47:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

suijinkai

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 一个蜗牛壳 at 2014-04-30 11:14:45
最近也想做微管的染色,问一下你用的是什么抗体?植物细胞核动物细胞的抗体是一样的吗?

我了解的不多,植物抗体好像比较少,动物的很多,但是细胞骨架之类的动植物共有且保守性比较高的蛋白,也可以用动物的抗体,我用的是sigma的T6199和T4026。回的晚了,不好意思。
机会只给有准备的人!
8楼2014-09-04 16:52:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ahhngwj

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by suijinkai at 2014-09-04 16:47:19
好像可以去叶绿素之类的色素,自发荧光能去吗?有没有依据?我去自发荧光用的是硼氢化钠。...

甲醇可以去叶绿素的
9楼2014-09-04 20:51:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 suijinkai 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 材料与化工 322求调剂 +6 然11 2026-03-19 6/300 2026-03-25 18:37 by haxia
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-20 4/200 2026-03-25 10:16 by allen-yin
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +3 钢铁大炮 2026-03-24 3/150 2026-03-24 22:03 by bingxueer79
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境,总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
信息提示
请填处理意见