应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 免疫组化中的问题
61/1返回列表
查看: 1771  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

苦茶暖心

银虫 (小有名气)

[求助] 免疫组化中的问题

大家好，想问下做小鼠脑的冰冻切片时，甲醛固定后蔗糖梯度脱水时，配制蔗糖时感觉30%的蔗糖配制后溶液有点温，可能是蔗糖溶解时放热，想问下用不用把蔗糖溶液放到四度冰箱降温再用，如果直接用的话，会不会增加免疫组化的非特异性染色？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
goon
1楼 2012-12-10 15:15:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenqin

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 不错的回复！ 2012-12-11 21:45:56
苦茶暖心: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-14 10:45:48
从我们做的经验来看，不必进行上述处理。冰冻切片后，晾干，然后用丙酮固定10-15min即可。如果没有时间直接做下去，还可以用塑料袋包好切片盒，置于4度冰箱内，在这样的温度与环境下，抗原不会消失。在做免疫组化时，取出，不必进行枸椽酸缓冲液高温抗原修改复；有时也不必进行tritonX-100进行细胞打孔，做免疫组化后没有出现非特异性染色。
赞一下 回复此楼
志在千里
2楼2012-12-10 19:38:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laoboshihou

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
苦茶暖心: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-14 10:45:36
冰冻切片后，晾干，然后用丙酮固定10-15min即可。在做免疫组化时，取出，不要进行枸椽酸缓冲液高温抗原修改复，加适当浓度的tritonX-100进行细胞打孔，做免疫组化后没有出现非特异性染色。
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-11 09:19:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jq2k

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

对脑的冰冻切片，我们通常用4%的多聚甲醛配30%蔗糖脱水，而多聚甲醛通常是保存在4度或室温，没有楼主所说的现象。如果是做贴片，那切完后用37°烤片1-2h然后进行下一步实验；如果是漂片(我们常用漂片)，则将切片收集于4%多聚甲醛中备用。丙酮或甲醇处理会使切片容易卷曲；至于triton或tween处理与否则视需要而定，对绝大多数抗原是不需要所谓的“打孔”的，对于染不出来的、难染的抗体才考虑增加膜通透性。
造成非特异染色的原因很多。
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-04 08:42:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckycly88

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jq2k at 2013-01-04 08:42:04
对脑的冰冻切片，我们通常用4%的多聚甲醛配30%蔗糖脱水，而多聚甲醛通常是保存在4度或室温，没有楼主所说的现象。如果是做贴片，那切完后用37°烤片1-2h然后进行下一步实验；如果是漂片(我们常用漂片)，则将切片收集 ...

我想向您请教，在切片前已经固定过了，切的片再放到PFA里有什么作用
赞一下 回复此楼
5楼2013-10-19 20:51:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jq2k

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare: 金币+2, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-10-21 08:37:25
这也算后固定吧，切片捞片会损伤片子，后固定一下会好点

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
6楼2013-10-20 10:16:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 苦茶暖心 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭