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苦茶暖心

银虫 (小有名气)

[求助] 免疫组化中的问题

大家好，想问下做小鼠脑的冰冻切片时，甲醛固定后蔗糖梯度脱水时，配制蔗糖时感觉30%的蔗糖配制后溶液有点温，可能是蔗糖溶解时放热，想问下用不用把蔗糖溶液放到四度冰箱降温再用，如果直接用的话，会不会增加免疫组化的非特异性染色？
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goon
1楼2012-12-10 15:15:49
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chenqin

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 不错的回复！ 2012-12-11 21:45:56
苦茶暖心: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-14 10:45:48
从我们做的经验来看，不必进行上述处理。冰冻切片后，晾干，然后用丙酮固定10-15min即可。如果没有时间直接做下去，还可以用塑料袋包好切片盒，置于4度冰箱内，在这样的温度与环境下，抗原不会消失。在做免疫组化时，取出，不必进行枸椽酸缓冲液高温抗原修改复；有时也不必进行tritonX-100进行细胞打孔，做免疫组化后没有出现非特异性染色。
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志在千里
2楼2012-12-10 19:38:31
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laoboshihou

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
苦茶暖心: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-14 10:45:36
冰冻切片后，晾干，然后用丙酮固定10-15min即可。在做免疫组化时，取出，不要进行枸椽酸缓冲液高温抗原修改复，加适当浓度的tritonX-100进行细胞打孔，做免疫组化后没有出现非特异性染色。
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3楼2012-12-11 09:19:17
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jq2k

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

对脑的冰冻切片，我们通常用4%的多聚甲醛配30%蔗糖脱水，而多聚甲醛通常是保存在4度或室温，没有楼主所说的现象。如果是做贴片，那切完后用37°烤片1-2h然后进行下一步实验；如果是漂片(我们常用漂片)，则将切片收集于4%多聚甲醛中备用。丙酮或甲醇处理会使切片容易卷曲；至于triton或tween处理与否则视需要而定，对绝大多数抗原是不需要所谓的“打孔”的，对于染不出来的、难染的抗体才考虑增加膜通透性。
造成非特异染色的原因很多。
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4楼2013-01-04 08:42:04
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luckycly88

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jq2k at 2013-01-04 08:42:04
对脑的冰冻切片，我们通常用4%的多聚甲醛配30%蔗糖脱水，而多聚甲醛通常是保存在4度或室温，没有楼主所说的现象。如果是做贴片，那切完后用37°烤片1-2h然后进行下一步实验；如果是漂片(我们常用漂片)，则将切片收集 ...

我想向您请教，在切片前已经固定过了，切的片再放到PFA里有什么作用
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5楼2013-10-19 20:51:15
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jq2k

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare: 金币+2, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-10-21 08:37:25
这也算后固定吧，切片捞片会损伤片子，后固定一下会好点

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2013-10-20 10:16:40
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