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caco-2细胞的紧密连接蛋白的免疫荧光染色
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这是本人近期做出的免疫荧光，目的是测细胞之间的紧密连接蛋白。步骤如下： 吸净培养液，用PBS冲洗5分钟×2次 ，在室温下用 3.7%的多聚甲醛固定 10min。然后清洗3遍。单层细胞用含 2%TX-100的 PBS 室温下液孵育 15min，清洗3次。然后加2%的牛血清蛋白（BSA）和1%的吐温-20封闭液常温封闭30分钟。再加1:300 的一抗：兔抗claudin-1，Claudin-5，于 4℃冰箱中孵育过夜，pbs洗3次。第二天用1:500的羊IgG-Alexa488抗兔，标记2h 后，再洗3遍，利用激光共聚焦显微镜观察。 不知道哪里不对，细胞在荧光观察细胞上面有一层雾一样的覆盖物，但拍出的荧光照片还算清晰。不知道那层覆盖物是什么？ 拍出的照片背景很重，有什么解决的办法？细胞上还有很多洞洞，也不知道什么原因。。。 请高手指点！！！  1.jpg  2.jpg |
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