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[求助]
caco-2细胞的紧密连接蛋白的免疫荧光染色
这是本人近期做出的免疫荧光,目的是测细胞之间的紧密连接蛋白。步骤如下:
吸净培养液,用PBS冲洗5分钟×2次 ,在室温下用 3.7%的多聚甲醛固定 10min。然后清洗3遍。单层细胞用含 2%TX-100的 PBS 室温下液孵育 15min,清洗3次。然后加2%的牛血清蛋白(BSA)和1%的吐温-20封闭液常温封闭30分钟。再加1:300 的一抗:兔抗claudin-1,Claudin-5,于 4℃冰箱中孵育过夜,pbs洗3次。第二天用1:500的羊IgG-Alexa488抗兔,标记2h 后,再洗3遍,利用激光共聚焦显微镜观察。
不知道哪里不对,细胞在荧光观察细胞上面有一层雾一样的覆盖物,但拍出的荧光照片还算清晰。不知道那层覆盖物是什么?
拍出的照片背景很重,有什么解决的办法?细胞上还有很多洞洞,也不知道什么原因。。。
请高手指点!!!
![caco-2细胞的紧密连接蛋白的免疫荧光染色]()
1.jpg
![caco-2细胞的紧密连接蛋白的免疫荧光染色-1]()
2.jpg |
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