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付情雪614

新虫 (初入文坛)

[求助] caco-2细胞的紧密连接蛋白的免疫荧光染色

这是本人近期做出的免疫荧光,目的是测细胞之间的紧密连接蛋白。步骤如下:
吸净培养液,用PBS冲洗5分钟×2次 ,在室温下用 3.7%的多聚甲醛固定 10min。然后清洗3遍。单层细胞用含 2%TX-100的 PBS 室温下液孵育 15min,清洗3次。然后加2%的牛血清蛋白(BSA)和1%的吐温-20封闭液常温封闭30分钟。再加1:300 的一抗:兔抗claudin-1,Claudin-5,于 4℃冰箱中孵育过夜,pbs洗3次。第二天用1:500的羊IgG-Alexa488抗兔,标记2h 后,再洗3遍,利用激光共聚焦显微镜观察。
不知道哪里不对,细胞在荧光观察细胞上面有一层雾一样的覆盖物,但拍出的荧光照片还算清晰。不知道那层覆盖物是什么?
拍出的照片背景很重,有什么解决的办法?细胞上还有很多洞洞,也不知道什么原因。。。
请高手指点!!!

caco-2细胞的紧密连接蛋白的免疫荧光染色
1.jpg


caco-2细胞的紧密连接蛋白的免疫荧光染色-1
2.jpg
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dyyqc

铜虫 (小有名气)

你好,你的Caco-2细胞可以给我一点吗,我是江苏徐州的,可以支付相关费用,谢谢了!
2楼2014-04-02 09:05:16
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付情雪614

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dyyqc at 2014-04-02 09:05:16
你好,你的Caco-2细胞可以给我一点吗,我是江苏徐州的,可以支付相关费用,谢谢了!

我的细胞代数有点大了,60多代
3楼2014-04-19 13:46:30
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付情雪614

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dyyqc at 2014-04-02 09:05:16
你好,你的Caco-2细胞可以给我一点吗,我是江苏徐州的,可以支付相关费用,谢谢了!

我的细胞代数有点大了,60多代
4楼2014-04-19 13:47:11
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dyyqc

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 付情雪614 at 2014-04-19 13:47:11
我的细胞代数有点大了,60多代...

你的细胞状态还好吗?我买的细胞传代以后就不贴壁了,全漂了,也没消化很长时间,就3-4分钟。不知道什么原因
5楼2014-04-22 14:21:26
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