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付情雪614

新虫 (初入文坛)

[求助] caco-2细胞的紧密连接蛋白的免疫荧光染色

这是本人近期做出的免疫荧光，目的是测细胞之间的紧密连接蛋白。步骤如下：
吸净培养液，用PBS冲洗5分钟×2次 ，在室温下用 3.7%的多聚甲醛固定 10min。然后清洗3遍。单层细胞用含 2%TX-100的 PBS 室温下液孵育 15min，清洗3次。然后加2%的牛血清蛋白（BSA）和1%的吐温-20封闭液常温封闭30分钟。再加1:300 的一抗：兔抗claudin-1，Claudin-5，于 4℃冰箱中孵育过夜，pbs洗3次。第二天用1:500的羊IgG-Alexa488抗兔，标记2h 后，再洗3遍，利用激光共聚焦显微镜观察。
不知道哪里不对，细胞在荧光观察细胞上面有一层雾一样的覆盖物，但拍出的荧光照片还算清晰。不知道那层覆盖物是什么？
拍出的照片背景很重，有什么解决的办法？细胞上还有很多洞洞，也不知道什么原因。。。
请高手指点！！！

caco-2细胞的紧密连接蛋白的免疫荧光染色
1.jpg


caco-2细胞的紧密连接蛋白的免疫荧光染色-1
2.jpg
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1楼2014-03-26 15:59:20
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付情雪614

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dyyqc at 2014-04-02 09:05:16
你好，你的Caco-2细胞可以给我一点吗，我是江苏徐州的，可以支付相关费用，谢谢了！

我的细胞代数有点大了，60多代
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4楼2014-04-19 13:47:11
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dyyqc

铜虫 (小有名气)
你好，你的Caco-2细胞可以给我一点吗，我是江苏徐州的，可以支付相关费用，谢谢了！
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2楼2014-04-02 09:05:16
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付情雪614

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dyyqc at 2014-04-02 09:05:16
你好，你的Caco-2细胞可以给我一点吗，我是江苏徐州的，可以支付相关费用，谢谢了！

我的细胞代数有点大了，60多代
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-19 13:46:30
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dyyqc

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 付情雪614 at 2014-04-19 13:47:11
我的细胞代数有点大了，60多代...

你的细胞状态还好吗？我买的细胞传代以后就不贴壁了，全漂了，也没消化很长时间，就3-4分钟。不知道什么原因
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5楼2014-04-22 14:21:26
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