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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

[求助] 免疫染色的细胞爬片总是脱落 已有2人参与

各位亲,使用chamber silde准备细胞爬片时遇到如下问题:
       细胞悬液加入后(-2 day),培养两天至细胞融合,开始诱导实验(0 day)。但是,对照组(增殖培养基)的细胞总容易在4-5 day 时出现脱落现象,诱导组细胞还不错。
    目前,已经尝试提高细胞密度, 降低细胞密度,使用胶原蛋白包被的chamber silde等方法,但是,效果都不太好。

希望各位亲提供一些指导意见!!

P.S 本人培养的是脂肪细胞
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sea03831

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-11 15:20:35
是营养耗尽导致细胞脱落吗?建议中间更换一次培养基,试试。
2楼2014-02-09 22:29:13
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sea03831 at 2014-02-09 22:29:13
是营养耗尽导致细胞脱落吗?建议中间更换一次培养基,试试。

不是的,一直都是换液的,但还是会脱落。后来,尝试不换液,半换液也还是一样脱落。
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3楼2014-02-10 17:21:38
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treetreew

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-11 15:20:39
chamber是容易掉,盖玻片好像还好一点,包fn/ln能好一些
或者换小圆片爬片,半斤八两都是。。。。我用小圆片的时候多,也要事先包fn/ln
4楼2014-02-11 09:06:29
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by treetreew at 2014-02-11 09:06:29
chamber是容易掉,盖玻片好像还好一点,包fn/ln能好一些
或者换小圆片爬片,半斤八两都是。。。。我用小圆片的时候多,也要事先包fn/ln

用了collagen I 的chamber 还是会脱落,有人说细胞增殖过快或者细胞太老了也会导致细胞容易卷边,脱落。不知道是不是这个原因。
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5楼2014-02-11 17:03:13
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treetreew

木虫 (小有名气)

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★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-13 19:15:34
满了肯定漂,老了就会趴。。。。。
时间比较久的话还是留出提前量吧,譬如4well的chamber我就种10E4个细胞
这种小圆片爬片或者chamberslide的我都会铺fn/ln,至少结果我都可以接受
collagen 我自己很少用,我们实验室还有人铺Gelatin,喔也不太用。。。。。
6楼2014-02-12 14:12:35
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by treetreew at 2014-02-12 14:12:35
满了肯定漂,老了就会趴。。。。。
时间比较久的话还是留出提前量吧,譬如4well的chamber我就种10E4个细胞
这种小圆片爬片或者chamberslide的我都会铺fn/ln,至少结果我都可以接受
collagen 我自己很少用,我们实 ...

一直都是用的Chamber slide。
Fibronectin包被的Chamber培养效果比Collagen I 的要好,是啊?那我试试看。不过,Fibronectin包被的Chamber在无血清培养方面,好像没有collagen 的好
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7楼2014-02-12 17:37:12
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by treetreew at 2014-02-12 14:12:35
满了肯定漂,老了就会趴。。。。。
时间比较久的话还是留出提前量吧,譬如4well的chamber我就种10E4个细胞
这种小圆片爬片或者chamberslide的我都会铺fn/ln,至少结果我都可以接受
collagen 我自己很少用,我们实 ...

4-well 的104个细胞会不会太少啊?2-3天后,细胞恐怕达不到80%汇合吧
小圆片爬片的,你使用的具体产品是??请指教!
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8楼2014-02-12 17:40:17
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treetreew

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
bjgymilyxz: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-02-13 16:31:05
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-13 19:15:45
就叫cover glass 什么也不用管,直接丢进去,都是灭菌好,铺好的
国产好像也有,自己清洗灭菌铺fn/ln
104我觉得不少了,你具体看情况吧,反正是为了照相,怎么好看怎么来
9楼2014-02-13 09:58:14
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by treetreew at 2014-02-13 09:58:14
就叫cover glass 什么也不用管,直接丢进去,都是灭菌好,铺好的
国产好像也有,自己清洗灭菌铺fn/ln
104我觉得不少了,你具体看情况吧,反正是为了照相,怎么好看怎么来

要是104/well,相当于5555/cm2,还是有点少的吧。如果只是培养2-3天就免疫染色的话,我的细胞还好,我感觉可能我的问题还是细胞有点老了,而且我的实验时间比较长。
下次用Fn,Ln包被的chamber 试试。
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10楼2014-02-13 16:30:16
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