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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 免疫染色的细胞爬片总是脱落
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

[求助] 免疫染色的细胞爬片总是脱落 已有2人参与

各位亲，使用chamber silde准备细胞爬片时遇到如下问题：
       细胞悬液加入后(-2 day)，培养两天至细胞融合，开始诱导实验（0 day）。但是，对照组（增殖培养基）的细胞总容易在4-5 day 时出现脱落现象，诱导组细胞还不错。
    目前，已经尝试提高细胞密度, 降低细胞密度，使用胶原蛋白包被的chamber silde等方法，但是，效果都不太好。

希望各位亲提供一些指导意见！！

P.S 本人培养的是脂肪细胞
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1楼 2014-01-29 11:28:50
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sea03831

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-11 15:20:35
是营养耗尽导致细胞脱落吗？建议中间更换一次培养基，试试。
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2楼2014-02-09 22:29:13
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sea03831 at 2014-02-09 22:29:13
是营养耗尽导致细胞脱落吗？建议中间更换一次培养基，试试。

不是的，一直都是换液的，但还是会脱落。后来，尝试不换液，半换液也还是一样脱落。
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3楼2014-02-10 17:21:38
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treetreew

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-11 15:20:39
chamber是容易掉，盖玻片好像还好一点，包fn/ln能好一些
或者换小圆片爬片，半斤八两都是。。。。我用小圆片的时候多，也要事先包fn/ln
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4楼2014-02-11 09:06:29
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by treetreew at 2014-02-11 09:06:29
chamber是容易掉，盖玻片好像还好一点，包fn/ln能好一些
或者换小圆片爬片，半斤八两都是。。。。我用小圆片的时候多，也要事先包fn/ln

用了collagen I 的chamber 还是会脱落，有人说细胞增殖过快或者细胞太老了也会导致细胞容易卷边，脱落。不知道是不是这个原因。
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5楼2014-02-11 17:03:13
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treetreew

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-13 19:15:34
满了肯定漂，老了就会趴。。。。。
时间比较久的话还是留出提前量吧，譬如4well的chamber我就种10E4个细胞
这种小圆片爬片或者chamberslide的我都会铺fn/ln，至少结果我都可以接受
collagen 我自己很少用，我们实验室还有人铺Gelatin，喔也不太用。。。。。
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6楼2014-02-12 14:12:35
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by treetreew at 2014-02-12 14:12:35
满了肯定漂，老了就会趴。。。。。
时间比较久的话还是留出提前量吧，譬如4well的chamber我就种10E4个细胞
这种小圆片爬片或者chamberslide的我都会铺fn/ln，至少结果我都可以接受
collagen 我自己很少用，我们实 ...

一直都是用的Chamber slide。
Fibronectin包被的Chamber培养效果比Collagen I 的要好，是啊？那我试试看。不过，Fibronectin包被的Chamber在无血清培养方面，好像没有collagen 的好
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7楼2014-02-12 17:37:12
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by treetreew at 2014-02-12 14:12:35
满了肯定漂，老了就会趴。。。。。
时间比较久的话还是留出提前量吧，譬如4well的chamber我就种10E4个细胞
这种小圆片爬片或者chamberslide的我都会铺fn/ln，至少结果我都可以接受
collagen 我自己很少用，我们实 ...

4-well 的104个细胞会不会太少啊？2-3天后，细胞恐怕达不到80%汇合吧
小圆片爬片的，你使用的具体产品是？？请指教！
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8楼2014-02-12 17:40:17
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treetreew

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
bjgymilyxz: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-02-13 16:31:05
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-13 19:15:45
就叫cover glass 什么也不用管，直接丢进去，都是灭菌好，铺好的
国产好像也有，自己清洗灭菌铺fn/ln
104我觉得不少了，你具体看情况吧，反正是为了照相，怎么好看怎么来
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9楼2014-02-13 09:58:14
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by treetreew at 2014-02-13 09:58:14
就叫cover glass 什么也不用管，直接丢进去，都是灭菌好，铺好的
国产好像也有，自己清洗灭菌铺fn/ln
104我觉得不少了，你具体看情况吧，反正是为了照相，怎么好看怎么来

要是104/well，相当于5555/cm2，还是有点少的吧。如果只是培养2-3天就免疫染色的话，我的细胞还好，我感觉可能我的问题还是细胞有点老了，而且我的实验时间比较长。
下次用Fn，Ln包被的chamber 试试。
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10楼2014-02-13 16:30:16
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