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child2012

新虫 (小有名气)

[求助] 免疫染色中的固定问题

刚刚接触免疫染色,总是染不上颜色,大家给看看是什么原因:1 染色的组织(很小)在活体内非常软,即使剖出来形态也不好易扭曲,所以,我都是先用多聚甲醛固定1h-3h,固定完后,组织变硬,形态也特别好看。所以我想问的是,固定后的组织是否交联程度较强,从而把 抗原封闭而导致不能染上色的?看到有人说要抗原修复,如果用高温修复,那么蛋白质不是变性了吗?变性后的抗原还能跟抗体结合吗?2 在加入1抗和2抗反应时,应该在低温还是高温反应呢?抗体一般保存在低温中,如果高温会不会也变性呢,从而不能结合乃至染色?请各位虫友指教。
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changemyself,changelife.
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HTweiyi

银虫 (小有名气)

你好,你这个问题我给你讲下,你的组织是石蜡切片,还是冰冻切片,不同的切片,对组织的损伤是不一样的,如果是石蜡的话,需要做修复的.至于多聚甲醛固定的话,时间长的话会产生影响的,一般室温固定20-30分钟就差不多了,至于抗体话,一般最高也就是37度下孵育
2楼2015-06-29 14:09:00
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mutant

铁虫 (小有名气)

我认为蛋白变性跟抗体与抗原结合没有关系,抗体和是抗原上的决定簇结合的,所以不最好修复一下,让他暴露出来
3楼2015-06-29 18:07:17
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child2012

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-06-29 14:09:00
你好,你这个问题我给你讲下,你的组织是石蜡切片,还是冰冻切片,不同的切片,对组织的损伤是不一样的,如果是石蜡的话,需要做修复的.至于多聚甲醛固定的话,时间长的话会产生影响的,一般室温固定20-30分钟就差不多了,至于 ...

应该属于冷冻切片,另外我也做整体的染色,之前我试过固定时间比较短的,30min、1h、2h 、3h等 结果却发现都没有染上色,而之前固定过夜的有染上色的。所以我又在思考是不是 抗原弥散了,或者是时间太长导致的。
changemyself,changelife.
4楼2015-06-30 20:40:48
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child2012

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by mutant at 2015-06-29 18:07:17
我认为蛋白变性跟抗体与抗原结合没有关系,抗体和是抗原上的决定簇结合的,所以不最好修复一下,让他暴露出来

最好修复吗?我也要高温修复试一下。谢谢。
changemyself,changelife.
5楼2015-06-30 21:39:41
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奔跑吧蛋白

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-06-29 14:09:00
你好,你这个问题我给你讲下,你的组织是石蜡切片,还是冰冻切片,不同的切片,对组织的损伤是不一样的,如果是石蜡的话,需要做修复的.至于多聚甲醛固定的话,时间长的话会产生影响的,一般室温固定20-30分钟就差不多了,至于 ...

请教一下,我想做冰冻切片,多聚甲醛固定后组织形态会比较好,但是会不会封闭抗原呢,不想做抗原修复

发自小木虫Android客户端
6楼2016-11-11 14:25:40
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