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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 免疫染色中的固定问题
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child2012

新虫 (小有名气)

[求助] 免疫染色中的固定问题

刚刚接触免疫染色，总是染不上颜色，大家给看看是什么原因：1 染色的组织（很小）在活体内非常软，即使剖出来形态也不好易扭曲，所以，我都是先用多聚甲醛固定1h-3h，固定完后，组织变硬，形态也特别好看。所以我想问的是，固定后的组织是否交联程度较强，从而把 抗原封闭而导致不能染上色的？看到有人说要抗原修复，如果用高温修复，那么蛋白质不是变性了吗？变性后的抗原还能跟抗体结合吗？2 在加入1抗和2抗反应时，应该在低温还是高温反应呢？抗体一般保存在低温中，如果高温会不会也变性呢，从而不能结合乃至染色？请各位虫友指教。
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changemyself,changelife.
1楼 2015-06-18 10:13:00
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child2012

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mutant at 2015-06-29 18:07:17
我认为蛋白变性跟抗体与抗原结合没有关系，抗体和是抗原上的决定簇结合的，所以不最好修复一下，让他暴露出来

最好修复吗？我也要高温修复试一下。谢谢。
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changemyself,changelife.
5楼2015-06-30 21:39:41
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HTweiyi

银虫 (小有名气)
你好,你这个问题我给你讲下,你的组织是石蜡切片,还是冰冻切片,不同的切片,对组织的损伤是不一样的,如果是石蜡的话,需要做修复的.至于多聚甲醛固定的话,时间长的话会产生影响的,一般室温固定20-30分钟就差不多了,至于抗体话,一般最高也就是37度下孵育
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2楼2015-06-29 14:09:00
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mutant

铁虫 (小有名气)
我认为蛋白变性跟抗体与抗原结合没有关系，抗体和是抗原上的决定簇结合的，所以不最好修复一下，让他暴露出来
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3楼2015-06-29 18:07:17
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child2012

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-06-29 14:09:00
你好,你这个问题我给你讲下,你的组织是石蜡切片,还是冰冻切片,不同的切片,对组织的损伤是不一样的,如果是石蜡的话,需要做修复的.至于多聚甲醛固定的话,时间长的话会产生影响的,一般室温固定20-30分钟就差不多了,至于 ...

应该属于冷冻切片，另外我也做整体的染色，之前我试过固定时间比较短的，30min、1h、2h 、3h等 结果却发现都没有染上色，而之前固定过夜的有染上色的。所以我又在思考是不是 抗原弥散了，或者是时间太长导致的。
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changemyself,changelife.
4楼2015-06-30 20:40:48
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