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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细胞染色问题 求教大师
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山落天外

银虫 (正式写手)

[求助] 细胞染色问题 求教大师

现在想做药物的细胞内吞实验，需要对细胞核和溶酶体染色 ，买的染液分别是Hoechst 33342 和 Lysotracker Green DND-26   但不知道二者染色顺序是怎样的？
急切期望有经验的高手能够指点相关细节
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1楼 2012-11-18 09:04:23
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

山落天外

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 内蒙古毛团团 at 2013-05-30 15:11:59
楼主你好 我是做生物金属材料的 以前一直搞金属，现在开始接触生物学，所以很多东西不懂。我想请教下，您做的药物的细胞内吞实验是用什么细胞？我现在想做巨噬细胞，您接触过么？细胞内吞实验的具体操作是什么样的？ ...

HeLa 细胞     我们实验室也是刚接触这块

我们做的细胞内吞实验 是用含药物载体的培养液培养细胞  然后用激光共聚焦显微镜 看药物在细胞内的分布   药物本身有荧光 另外可以用细胞核  细胞质染色剂把核质都染了 看具体分布  
  至于单独溶酶体 没看过
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8楼2013-05-30 18:31:53
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普通回帖

wangmingyue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
山落天外: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2012-11-20 17:06:16
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-20 17:08:36
Lysotracker 先染，一般是在实验设计的时间比如2h到了之后，吸去培养液，换成含有Lysotracker 的培养液（使用说明中会有稀释倍数和孵育时间）。然后取出，PBS洗，固定，染核。
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2楼2012-11-20 12:30:45
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山落天外

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangmingyue at 2012-11-20 12:30:45
Lysotracker 先染，一般是在实验设计的时间比如2h到了之后，吸去培养液，换成含有Lysotracker 的培养液（使用说明中会有稀释倍数和孵育时间）。然后取出，PBS洗，固定，染核。

非常感谢 也就是说 染溶酶体---固定---再染细胞核这个顺序了？？  

还想请教一个问题是有文献说染溶酶体时需要  含Lysotracker 的培养液不含FBS牛血清蛋白  如果是这样的话具体该怎么操作呢？
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3楼2012-11-20 17:05:52
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wangmingyue

木虫 (小有名气)
把原来加药的培养液吸去，用不含血清的培养液或者PBS洗一遍到两遍。Lysotracker同样用不含血清的培养液稀释后加到细胞培养容器内。
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4楼2012-11-20 19:07:52
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山落天外

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangmingyue at 2012-11-20 19:07:52
把原来加药的培养液吸去，用不含血清的培养液或者PBS洗一遍到两遍。Lysotracker同样用不含血清的培养液稀释后加到细胞培养容器内。

再次表示感谢
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5楼2012-11-20 21:38:00
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wangmingyue

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 山落天外 at 2012-11-20 21:38:00
再次表示感谢...

不必客气，大家相互学习交流
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6楼2012-11-21 08:42:53
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内蒙古毛团团

木虫 (小有名气)
楼主你好 我是做生物金属材料的 以前一直搞金属，现在开始接触生物学，所以很多东西不懂。我想请教下，您做的药物的细胞内吞实验是用什么细胞？我现在想做巨噬细胞，您接触过么？细胞内吞实验的具体操作是什么样的？如果我只是想看溶酶体对金属的作用，那么单独的溶酶体可以得到么？还是必须在细胞中才能起作用？
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7楼2013-05-30 15:11:59
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内蒙古毛团团

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 山落天外 at 2013-05-30 18:31:53
HeLa 细胞     我们实验室也是刚接触这块

我们做的细胞内吞实验 是用含药物载体的培养液培养细胞  然后用激光共聚焦显微镜 看药物在细胞内的分布   药物本身有荧光 另外可以用细胞核  细胞质染色剂把核质都染了 ...

谢谢鸟~
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9楼2013-05-30 21:47:51
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as8818320

新虫 (初入文坛)
楼主你好，Lysotracker你是怎么稀释的呀，添加有Lysotracker后需要孵育多久呀？在荧光显微镜下能看到荧光么？还有它有PH值要求么？求帮助
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10楼2013-10-22 23:39:36
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