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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细胞染色问题 求教大师
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山落天外

银虫 (正式写手)

[求助] 细胞染色问题 求教大师

现在想做药物的细胞内吞实验，需要对细胞核和溶酶体染色 ，买的染液分别是Hoechst 33342 和 Lysotracker Green DND-26   但不知道二者染色顺序是怎样的？
急切期望有经验的高手能够指点相关细节
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1楼2012-11-18 09:04:23
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as8818320

新虫 (初入文坛)
楼主你好，Lysotracker你是怎么稀释的呀，添加有Lysotracker后需要孵育多久呀？在荧光显微镜下能看到荧光么？还有它有PH值要求么？求帮助
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10楼2013-10-22 23:39:36
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wangmingyue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
山落天外: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2012-11-20 17:06:16
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-20 17:08:36
Lysotracker 先染，一般是在实验设计的时间比如2h到了之后，吸去培养液，换成含有Lysotracker 的培养液（使用说明中会有稀释倍数和孵育时间）。然后取出，PBS洗，固定，染核。
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2楼2012-11-20 12:30:45
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山落天外

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangmingyue at 2012-11-20 12:30:45
Lysotracker 先染，一般是在实验设计的时间比如2h到了之后，吸去培养液，换成含有Lysotracker 的培养液（使用说明中会有稀释倍数和孵育时间）。然后取出，PBS洗，固定，染核。

非常感谢 也就是说 染溶酶体---固定---再染细胞核这个顺序了？？  

还想请教一个问题是有文献说染溶酶体时需要  含Lysotracker 的培养液不含FBS牛血清蛋白  如果是这样的话具体该怎么操作呢？
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3楼2012-11-20 17:05:52
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wangmingyue

木虫 (小有名气)
把原来加药的培养液吸去，用不含血清的培养液或者PBS洗一遍到两遍。Lysotracker同样用不含血清的培养液稀释后加到细胞培养容器内。
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4楼2012-11-20 19:07:52
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