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何田田615

木虫 (小有名气)

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[求助] 散金币请教荧光显微镜染色问题？

我用丫啶橙和碘化丙啶染色细菌（硫酸盐还原菌），用尼康的倒置荧光显微镜观测，我看文献上说这种双染色法可以出现两种颜色，死菌是绿色，活菌是红色，为什么我们染完观测的都是一种颜色，只是一种暗点，一种亮点（附图）。我的激发光源是绿光。请教相关专家解答！不胜感激！！

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1楼2011-09-22 12:48:47

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quiller2000

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

何田田615(金币+5): 虽然没给出准确答案，但还是谢谢你了! 2011-09-23 10:51:11

丫啶橙的激发波长为488,可以穿透细胞膜与DNA结合，发射绿色荧光；而碘化丙啶不能穿透细胞膜，只能穿透死亡的细胞，此时细胞膜破损，进而与DNA结合，激发波长也是488，发出红色荧光。

从你的图片来看，似乎染料都没有进入细胞啊，同时你也没有很好的对焦，因此无论是死细胞还是活细胞，好像不能给出判断呢。PS，那些亮的可能是死细胞，呵呵。搞不清楚！