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何田田615

木虫 (小有名气)

[求助] 散金币请教荧光显微镜染色问题?

我用丫啶橙和碘化丙啶染色细菌(硫酸盐还原菌),用尼康的倒置荧光显微镜观测,我看文献上说这种双染色法可以出现两种颜色,死菌是绿色,活菌是红色,为什么我们染完观测的都是一种颜色,只是一种暗点,一种亮点(附图)。我的激发光源是绿光。请教相关专家解答!不胜感激!!
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

何田田615(金币+5): 虽然没给出准确答案 ,但还是谢谢你了! 2011-09-23 10:51:11
丫啶橙的激发波长为488,可以穿透细胞膜与DNA结合,发射绿色荧光;而碘化丙啶不能穿透细胞膜,只能穿透死亡的细胞,此时细胞膜破损,进而与DNA结合,激发波长也是488,发出红色荧光。

从你的图片来看,似乎染料都没有进入细胞啊,同时你也没有很好的对焦,因此无论是死细胞还是活细胞,好像不能给出判断呢。PS,那些亮的可能是死细胞,呵呵。搞不清楚!
致良知
2楼2011-09-22 23:49:35
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何田田615

木虫 (小有名气)

PS:我的试样是在铜金属表面直接染色,用的是倒置荧光显微镜,目的是看金属表面附着菌的数量!
3楼2011-09-23 11:01:03
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lpl0032

金虫 (小有名气)

你好,请问现在还做双染色嚒?求助~
endnote
4楼2012-07-12 20:31:13
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