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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细胞染色问题 求教大师
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山落天外

银虫 (正式写手)

[求助] 细胞染色问题 求教大师

现在想做药物的细胞内吞实验，需要对细胞核和溶酶体染色 ，买的染液分别是Hoechst 33342 和 Lysotracker Green DND-26   但不知道二者染色顺序是怎样的？
急切期望有经验的高手能够指点相关细节
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1楼2012-11-18 09:04:23
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山落天外

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangmingyue at 2012-11-20 12:30:45
Lysotracker 先染，一般是在实验设计的时间比如2h到了之后，吸去培养液，换成含有Lysotracker 的培养液（使用说明中会有稀释倍数和孵育时间）。然后取出，PBS洗，固定，染核。

非常感谢 也就是说 染溶酶体---固定---再染细胞核这个顺序了？？  

还想请教一个问题是有文献说染溶酶体时需要  含Lysotracker 的培养液不含FBS牛血清蛋白  如果是这样的话具体该怎么操作呢？
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3楼2012-11-20 17:05:52
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山落天外

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangmingyue at 2012-11-20 19:07:52
把原来加药的培养液吸去，用不含血清的培养液或者PBS洗一遍到两遍。Lysotracker同样用不含血清的培养液稀释后加到细胞培养容器内。

再次表示感谢
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5楼2012-11-20 21:38:00
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山落天外

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 内蒙古毛团团 at 2013-05-30 15:11:59
楼主你好 我是做生物金属材料的 以前一直搞金属，现在开始接触生物学，所以很多东西不懂。我想请教下，您做的药物的细胞内吞实验是用什么细胞？我现在想做巨噬细胞，您接触过么？细胞内吞实验的具体操作是什么样的？ ...

HeLa 细胞     我们实验室也是刚接触这块

我们做的细胞内吞实验 是用含药物载体的培养液培养细胞  然后用激光共聚焦显微镜 看药物在细胞内的分布   药物本身有荧光 另外可以用细胞核  细胞质染色剂把核质都染了 看具体分布  
  至于单独溶酶体 没看过
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8楼2013-05-30 18:31:53
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山落天外

银虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by as8818320 at 2013-10-22 23:39:36
楼主你好，Lysotracker你是怎么稀释的呀，添加有Lysotracker后需要孵育多久呀？在荧光显微镜下能看到荧光么？还有它有PH值要求么？求帮助

容量瓶稀释 买来的浓度也很小  很容易稀释的
具体浓度染色具体时间可以参考相关领域文献
我们是250 nM for 20 min

一般是用7.4稀释的吧 太高太低是否有影响不太清楚
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11楼2013-10-23 08:49:44
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