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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » DAPI 染色问题：只染了细胞质没染细胞核。郁闷中，求破。
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aeon8868

金虫 (正式写手)

[求助] DAPI 染色问题：只染了细胞质没染细胞核。郁闷中，求破。 已有6人参与

新手求助各位，最近两天做的DAPI染色出现了异常结果。见图。
请问各位，这会不会是细胞支原体污染？？（最担心这个）即便是污染，为什么细胞核没有被染到？
应该不是dapi太老放太久的原因，我试了新稀释的dapi也是一样的结果。DAPI 染色问题：只染了细胞质没染细胞核。郁闷中，求破。
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DAPI 染色问题：只染了细胞质没染细胞核。郁闷中，求破。-1
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    • 2014-08-14 16:48:39, 262.12 K

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1楼 2014-08-14 16:49:51
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ll19841008

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我们当时是染植物的，不同的植物我们使用的BUFFER pH值不同。
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10楼2014-08-20 09:26:28
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resurgam

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
aeon8868(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-20 09:58:31
DAPI我们实验室都是新配的，长期储存放-20度，短期就放4度，用锡箔纸包着。细胞固定透化以后1ug/ml的浓度，染1min就可以了，要不然就太亮。反正挺便宜，要不你买了重新配吧。
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11楼2014-08-20 09:27:16
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水云天0101

银虫 (小有名气)
你这个现象我也出现过，当时是新手，是因为你没有透化处理，你需要先固定或者曲拉通透化都可以，然后DAPI（50%）这样比较节约，15分钟就可以染上了。100%成功。祝你顺利~~
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12楼2014-08-24 16:42:10
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zjlqingdao

木虫 (正式写手)
不好意思，还真是不太清楚，希望你早日解决这个问题问题，如果细胞的问题我觉得你可以染另外一种你确信没有污染的试试，逐个排除。
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4楼2014-08-15 08:32:53
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zero19871029

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aeon8868 at 2014-08-14 18:48:51
过夜的样品还是蓝圈，没有蓝细胞核。
上周测还正常，dapi不会忽然失效吧？...

过夜不一定是最好哦，最好还是摸一下条件
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5楼2014-08-15 17:16:52
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zero19871029

新虫 (小有名气)
★
aeon8868(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-16 12:44:29
引用回帖:
6楼: Originally posted by aeon8868 at 2014-08-15 19:54:53
过夜不过夜都一个样呀。有没有那种污染培养基不浑浊但是会破坏细胞核？dapi根本进不到细胞核里。...

DAPI是很好染色的，个人认为真心不需要过夜，注意下避光就可以了~
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7楼2014-08-16 10:38:15
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清雅风

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
染色的过程注意避光，是不是你拍照的速度太慢，荧光消退了

[ 发自小木虫客户端 ]
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朝着自己的理想奔跑，就是幸福！
8楼2014-08-17 06:54:55
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大鱼大鱼

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

DAPI不能染太久吧，注意避光，显微镜亮度可以再调低点，一般只能看到一圆点。建议好好看看外文的文献一般都有相关方法

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2014-08-20 08:40:32
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普通回帖

zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
aeon8868(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-14 20:01:22
建议做个时间梯度，不同实验室DPAI染色的时间也不一样，从几分钟到过夜不等~
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2楼2014-08-14 17:24:42
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aeon8868

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-08-14 17:24:42
建议做个时间梯度，不同实验室DPAI染色的时间也不一样，从几分钟到过夜不等~

过夜的样品还是蓝圈，没有蓝细胞核。
上周测还正常，dapi不会忽然失效吧？
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3楼2014-08-14 18:48:51
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aeon8868

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-08-15 17:16:52
过夜不一定是最好哦，最好还是摸一下条件...

过夜不过夜都一个样呀。有没有那种污染培养基不浑浊但是会破坏细胞核？dapi根本进不到细胞核里。
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6楼2014-08-15 19:54:53
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