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诺曼底1227铁杆木虫 (正式写手)
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immunocytochemistry实验的问题
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最近在做用一些细胞的surface marker antibody来染细胞，并且通过荧光显微镜来观察这些marker的表达情况，但不知道为什么总是只能观察到DAPI染的细胞核，而看不到surface marker的表达。不过我做过flow，flow结果现实的是positive results，所以觉得可能是我实验操作的问题，所以想请教一下各位高手，能不能帮我看一下我的实验步骤有什么问题，多谢 实验基本步骤如下： 1. 用2% formalin固定30min 2. 将antigen retrieval buffer（我用的是Tris-EDTA, 10mM Tris Base, 1mM EDTA, 0.05% Tween 20, pH 9.0)煮沸，将种有细胞的slide放进去，煮大概20min； 3. 用1% BSA-PBS溶液block 1h，室温； 4. 用blocking buffer稀释的CD29一抗来和slide孵育2h, 室温； 5. 用blocking buffer稀释的含有FITC的二抗和slide孵育1h，室温； 6. 用PBS洗slide三次，每次5min； 7. 用DAPI染色 大概步骤就是上面所说的。 不知道有什么问题没有？我也问过买CD29的公司，他们的回复是说CD29可以用作ICC的，但必须要做antigen retrieval这一步。 请各位帮帮忙，多谢 |
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