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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » DAPI染色问题
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aeon8868

金虫 (正式写手)

[求助] DAPI染色问题 已有1人参与

DAPI不能染细胞核的问题仍然没有解决。
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7771429
有时候能发现几个细胞核被染到了，但是大部分都是一个黑洞。
请大家帮忙看看，这是不是支原体？还是什么原因。求分析！

DAPI染色问题
Image1-1.jpg


DAPI染色问题-1
Image3 (2).jpg


DAPI染色问题-2
Image4 (2).jpg


DAPI染色问题-3
Image4.jpg
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1楼 2014-08-19 18:02:56
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xipha

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aeon8868(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-20 09:52:20
有可能是没有固定好吧,你固定前用PBS好好洗洗,然后用多聚甲醛固定一下,再染色试试.
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2楼2014-08-20 03:47:55
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aeon8868

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xipha at 2014-08-20 03:47:55
有可能是没有固定好吧,你固定前用PBS好好洗洗,然后用多聚甲醛固定一下,再染色试试.

染的活细胞，没有固定。DAPI染完也没有冲洗。总觉得细胞质被染上的很诡异，细胞质里有那么多DNA吗。。
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3楼2014-08-20 10:10:10
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muyuchc

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aeon8868 at 2014-08-20 10:10:10
染的活细胞，没有固定。DAPI染完也没有冲洗。总觉得细胞质被染上的很诡异，细胞质里有那么多DNA吗。。...

DAPI也可以与RNA结合，可以加点RNase试试.
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4楼2014-08-20 11:04:33
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xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aeon8868 at 2014-08-20 10:10:10
染的活细胞，没有固定。DAPI染完也没有冲洗。总觉得细胞质被染上的很诡异，细胞质里有那么多DNA吗。。...

这个染完了还是要洗一下的. 染料什么的最喜欢非特异性吸附了. 不过洗一下应该不会有太大改变. 为什么你不固定? 染完DAPI的细胞还可以继续用么?
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5楼2014-08-21 05:57:16
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aeon8868

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xipha at 2014-08-21 05:57:16
这个染完了还是要洗一下的. 染料什么的最喜欢非特异性吸附了. 不过洗一下应该不会有太大改变. 为什么你不固定? 染完DAPI的细胞还可以继续用么?...

考虑过继续用，但是最近这个情况真的不知道怎么进行了。。
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6楼2014-08-22 21:21:31
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生物农民工

银虫 (初入文坛)
后来如何解决的呢？
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7楼2021-12-23 15:00:13
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