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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌染色计数的问题
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sheepdawn

木虫 (小有名气)

[求助] 细菌染色计数的问题 已有1人参与

大家好：
    小弟想请教一下大家，我养的是氧化亚铁硫杆菌，由于菌体比较小，大概1μm，所以用显微镜直接观察的话比较费劲，虽然也能看得到，但不是很清楚，想用染料进行染色之后在用血球计数板观察计数，那样比较准确一点。
    现在想问一下大家，我要观察活菌数或者总的菌体数的话，一般用什么染料染色呢，我只是染色后计数，没有其他的要求，不知道染料的浓度和染色时间什么的，染完之后就能直接观察？做过的人能详细说一下吗，先谢谢大家了！
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1楼 2013-10-05 17:56:28
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-10-06 22:11:25
sheepdawn: 金币+5, ★有帮助 2013-10-08 08:34:08
我觉得你染色后用计数板计数也很麻烦啊！而且不准确啊，如果要精确还是涂板，如果只是参考，可以测定OD600的吸光值啊。
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www------sr-------------
2楼2013-10-06 20:15:00
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sheepdawn

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2013-10-06 20:15:00
我觉得你染色后用计数板计数也很麻烦啊！而且不准确啊，如果要精确还是涂板，如果只是参考，可以测定OD600的吸光值啊。

我是检测加药组和空白组的区别，也就是测个相对的值，不要求特别精确，只要能看出来实验组和对照组有区别就行了，涂板不太现实，我这个菌在板子上得长一个礼拜才能看见菌落，而且我看我的这个菌文献上一般也是细菌计数板计数，所以只要能有助于我观察计数就行了，OD600我测了，但是鉴于我这个实验的特殊情况，培液容易产生一些白色的悬浮状细小颗粒，影响测OD值，所以迫不得已才想到计数。
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3楼2013-10-06 22:16:29
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yawei1983

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以试一下DAPI染色计数。
不过我觉得很小的细菌貌似不能用血球计数板，看不到的吧。血球计数板只能用于比较大的酵母菌或真菌孢子的计数。
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4楼2013-10-07 10:56:21
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sheepdawn at 2013-10-06 22:16:29
我是检测加药组和空白组的区别，也就是测个相对的值，不要求特别精确，只要能看出来实验组和对照组有区别就行了，涂板不太现实，我这个菌在板子上得长一个礼拜才能看见菌落，而且我看我的这个菌文献上一般也是细菌 ...

你的菌体很小，也许可以先过滤一下，去除白色悬浮，在测定OD
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www------sr-------------
5楼2013-10-07 15:26:06
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最好的选择，live/dead baclight kit，需要荧光显微镜，黑色过滤膜
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环境卫生、微生物学、卫生应急
6楼2013-10-08 08:21:40
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sheepdawn

木虫 (小有名气)
内容已删除
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7楼2013-10-08 08:31:24
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sheepdawn

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2013-10-07 15:26:06
你的菌体很小，也许可以先过滤一下，去除白色悬浮，在测定OD...

嗯，谢谢，不过我最后用结晶紫染了一下，感觉稍微好观察了一些。
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8楼2013-10-08 08:33:20
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sheepdawn

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by mizhoulong at 2013-10-08 08:21:40
最好的选择，live/dead baclight kit，需要荧光显微镜，黑色过滤膜

嗯，这个试剂盒之前买了本来想用来观察生物膜的，但是激光共聚焦显微镜下面没看到什么东西，不知道是染色液浓度不够还是菌体本来就太少了。你做过类似的东西的话，能说一下用的染色液的终浓度还有染色时间等一些具体的实验步骤吗，感觉文献上不太靠谱啊，只能参考，谢谢了！
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9楼2013-10-08 08:38:05
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

激光共聚焦！ 大炮打蚊子啊，用普通的荧光显微镜就可以了

可以用油镜的
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环境卫生、微生物学、卫生应急
10楼2013-10-08 08:49:39
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