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【求助/交流】生孢梭菌计数已有4人参与
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请问生孢梭菌的计数方法是什么呢？我要做无菌检查。谢谢各位。 在操作规范中的无菌检查中有这样的描述：生孢梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中，培养18-27h.........上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每毫升含菌小于100菌落形成单位i的菌悬液 请问每毫升含菌小于100菌落形成单位i的菌悬液要怎么得知呢？是做计数吗？怎么做呢 [ Last edited by 王珊珊1987 on 2010-5-4 at 16:36 ] |
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 无菌检查 |
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2楼2010-05-04 11:10:20
yushanyou12
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+6):good！ 2010-05-04 20:50:59
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你是在药厂工作的？恩，菌悬液的浓度要求的确是每毫升小于100cfu，但是最好在50到100cfu之间，小于50的话容易出现假阴性。还有你是要做无菌的方法验证还是无菌培养基的灵敏度检查呢？至于确定菌的量，是在硫乙醇中计数的。 其实无菌方法验证中的菌悬液的制备也是依中国药典（2005年版二部）附录XI H无菌检查法中“培养基灵敏度检查”项下的方法，制备成小于100 CFU/ml的对照用菌液。所以无论你做什么，菌悬液的制备方法都是一样的。 具体方法就是，先把生孢梭菌在硫乙醇中培养24小时，然后吸取1毫升培养液用生理盐水进行10倍稀释，我的经验是，稀释到10的-7次方就是在100cfu以下了（这个你得自己多做几次平行实验或验证实验，看到底稀释到多少倍。最初不好把握的时候可以同时培养几个临近的梯度），然后取至少200ml的硫乙醇酸盐培养基到试管里（要求无菌），然后接种1ml制备好的菌悬液到硫乙醇试管里，在32.5度下培养18h，然后开始计数。生孢梭菌在液体的硫乙醇里会长成梭子一样的单个菌落，这时拿的时候千万不要震动，然后开始计数（一个单独的“梭子”计一个菌落）。 注：如果培养时间太长会产生浑浊，不便于计数。如果震动试管也会浑浊。硫乙醇的量尽量大一点，这样便于计数。 一些具体的东西，还需要你实际去操作后，发现问题，再解决问题。貌似你现在的经验不是很足，最好的是找个懂的人带你做几次，或去别的公司或研究所参观学习，这样学起来会快一点。最后祝贺你成功。 |
3楼2010-05-04 17:34:39
4楼2010-05-05 00:15:39
5楼2010-05-06 07:57:21