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sheepdawn

木虫 (小有名气)

[求助] 细菌染色计数的问题 已有1人参与

大家好:
    小弟想请教一下大家,我养的是氧化亚铁硫杆菌,由于菌体比较小,大概1μm,所以用显微镜直接观察的话比较费劲,虽然也能看得到,但不是很清楚,想用染料进行染色之后在用血球计数板观察计数,那样比较准确一点。
    现在想问一下大家,我要观察活菌数或者总的菌体数的话,一般用什么染料染色呢,我只是染色后计数,没有其他的要求,不知道染料的浓度和染色时间什么的,染完之后就能直接观察?做过的人能详细说一下吗,先谢谢大家了!
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yawei1983

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以试一下DAPI染色计数。
不过我觉得很小的细菌貌似不能用血球计数板,看不到的吧。血球计数板只能用于比较大的酵母菌或真菌孢子的计数。
4楼2013-10-07 10:56:21
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2013-10-06 22:11:25
sheepdawn: 金币+5, 有帮助 2013-10-08 08:34:08
我觉得你染色后用计数板计数也很麻烦啊!而且不准确啊,如果要精确还是涂板,如果只是参考,可以测定OD600的吸光值啊。
www------sr-------------
2楼2013-10-06 20:15:00
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sheepdawn

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2013-10-06 20:15:00
我觉得你染色后用计数板计数也很麻烦啊!而且不准确啊,如果要精确还是涂板,如果只是参考,可以测定OD600的吸光值啊。

我是检测加药组和空白组的区别,也就是测个相对的值,不要求特别精确,只要能看出来实验组和对照组有区别就行了,涂板不太现实,我这个菌在板子上得长一个礼拜才能看见菌落,而且我看我的这个菌文献上一般也是细菌计数板计数,所以只要能有助于我观察计数就行了,OD600我测了,但是鉴于我这个实验的特殊情况,培液容易产生一些白色的悬浮状细小颗粒,影响测OD值,所以迫不得已才想到计数。
3楼2013-10-06 22:16:29
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sheepdawn at 2013-10-06 22:16:29
我是检测加药组和空白组的区别,也就是测个相对的值,不要求特别精确,只要能看出来实验组和对照组有区别就行了,涂板不太现实,我这个菌在板子上得长一个礼拜才能看见菌落,而且我看我的这个菌文献上一般也是细菌 ...

你的菌体很小,也许可以先过滤一下,去除白色悬浮,在测定OD
www------sr-------------
5楼2013-10-07 15:26:06
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