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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌染色计数的问题
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sheepdawn

木虫 (小有名气)

[求助] 细菌染色计数的问题 已有1人参与

大家好：
    小弟想请教一下大家，我养的是氧化亚铁硫杆菌，由于菌体比较小，大概1μm，所以用显微镜直接观察的话比较费劲，虽然也能看得到，但不是很清楚，想用染料进行染色之后在用血球计数板观察计数，那样比较准确一点。
    现在想问一下大家，我要观察活菌数或者总的菌体数的话，一般用什么染料染色呢，我只是染色后计数，没有其他的要求，不知道染料的浓度和染色时间什么的，染完之后就能直接观察？做过的人能详细说一下吗，先谢谢大家了！
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1楼 2013-10-05 17:56:28
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sheepdawn

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2013-10-06 20:15:00
我觉得你染色后用计数板计数也很麻烦啊！而且不准确啊，如果要精确还是涂板，如果只是参考，可以测定OD600的吸光值啊。

我是检测加药组和空白组的区别，也就是测个相对的值，不要求特别精确，只要能看出来实验组和对照组有区别就行了，涂板不太现实，我这个菌在板子上得长一个礼拜才能看见菌落，而且我看我的这个菌文献上一般也是细菌计数板计数，所以只要能有助于我观察计数就行了，OD600我测了，但是鉴于我这个实验的特殊情况，培液容易产生一些白色的悬浮状细小颗粒，影响测OD值，所以迫不得已才想到计数。
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3楼2013-10-06 22:16:29
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-10-06 22:11:25
sheepdawn: 金币+5, ★有帮助 2013-10-08 08:34:08
我觉得你染色后用计数板计数也很麻烦啊！而且不准确啊，如果要精确还是涂板，如果只是参考，可以测定OD600的吸光值啊。
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www------sr-------------
2楼2013-10-06 20:15:00
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yawei1983

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以试一下DAPI染色计数。
不过我觉得很小的细菌貌似不能用血球计数板，看不到的吧。血球计数板只能用于比较大的酵母菌或真菌孢子的计数。
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4楼2013-10-07 10:56:21
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sheepdawn at 2013-10-06 22:16:29
我是检测加药组和空白组的区别，也就是测个相对的值，不要求特别精确，只要能看出来实验组和对照组有区别就行了，涂板不太现实，我这个菌在板子上得长一个礼拜才能看见菌落，而且我看我的这个菌文献上一般也是细菌 ...

你的菌体很小，也许可以先过滤一下，去除白色悬浮，在测定OD
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www------sr-------------
5楼2013-10-07 15:26:06
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