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如何证明荧光标记的多肽和肿瘤细胞的亲和力，求细胞摄取方面的实验步骤。
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手头上有一种荧光标记肽，FITC-peptide，据文献所述该肽能靶向肿瘤细胞。,那么如何证明荧光标记的多肽和肿瘤细胞的亲和力，需要详细点的实验方案。 A打算： 1，把MCF-7细胞种在12孔板（密度摸索），然后用含无血清的DEME饥饿过夜。 2，然后用含FITC-peptide的无血清DEME孵育一段时间（孵育时间、浓度有待摸索）。 3，然后4%多聚甲醛固定，PBS洗，然后DAPI染色，再PBS洗，然后封片。上荧光显微镜。 4，请问这样可以吗？？过程哪部有问题啊？？ B另外：有个师姐是这样说的。采用共聚焦皿或细胞爬片 1，把MCF-7细胞种在共聚焦皿或细胞爬片，然后用含无血清的DEME饥饿过夜。 2，然后4%多聚甲醛固定，PBS洗,Triton X-100通透20min，PBS洗。BSA封闭30 min，PBS洗 3，一抗4℃孵育过夜（我压根就没有一抗，是不是可以去掉这步） 4，加FITC-peptide孵育（浓度时间不确定啊） 5然后4%多聚甲醛固定，PBS洗，然后DAPI染色，再PBS洗，然后封片。上共聚焦。 6，各位大神，我真不知道怎么做啊。A方法，FITC-peptide进入细胞时，细胞还没有死， “然后4%多聚甲醛固定，PBS洗，然后DAPI染色，再PBS洗，然后封片”，也怕这步耗时长，荧光淬灭。 B方法,FITC-peptide进细胞的时候，细胞就死掉了。那样做的对吗。 求这种实验的详细步骤，还有没有其他方法啊~？？！！   |
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自己帮顶 2楼2016-02-24 10:52:48
Congyong0909
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