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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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小英上学

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何证明荧光标记的多肽和肿瘤细胞的亲和力,求细胞摄取方面的实验步骤。

手头上有一种荧光标记肽,FITC-peptide,据文献所述该肽能靶向肿瘤细胞。,那么如何证明荧光标记的多肽和肿瘤细胞的亲和力,需要详细点的实验方案。
A打算:
1,把MCF-7细胞种在12孔板(密度摸索),然后用含无血清的DEME饥饿过夜。
2,然后用含FITC-peptide的无血清DEME孵育一段时间(孵育时间、浓度有待摸索)。
3,然后4%多聚甲醛固定,PBS洗,然后DAPI染色,再PBS洗,然后封片。上荧光显微镜。
4,请问这样可以吗??过程哪部有问题啊??
B另外:有个师姐是这样说的。采用共聚焦皿或细胞爬片
1,把MCF-7细胞种在共聚焦皿或细胞爬片,然后用含无血清的DEME饥饿过夜。
2,然后4%多聚甲醛固定,PBS洗,Triton X-100通透20min,PBS洗。BSA封闭30 min,PBS洗
3,一抗4℃孵育过夜(我压根就没有一抗,是不是可以去掉这步)
4,加FITC-peptide孵育(浓度时间不确定啊)
5然后4%多聚甲醛固定,PBS洗,然后DAPI染色,再PBS洗,然后封片。上共聚焦。
6,各位大神,我真不知道怎么做啊。A方法,FITC-peptide进入细胞时,细胞还没有死,
“然后4%多聚甲醛固定,PBS洗,然后DAPI染色,再PBS洗,然后封片”,也怕这步耗时长,荧光淬灭。
B方法,FITC-peptide进细胞的时候,细胞就死掉了。那样做的对吗。

求这种实验的详细步骤,还有没有其他方法啊~??!!
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小英上学

新虫 (初入文坛)

自己帮顶
2楼2016-02-24 10:52:48
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Congyong0909

新虫 (初入文坛)

SPR是不是可以直接测啊,非要接荧光么
3楼2016-03-11 01:00:17
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15616184889

新虫 (初入文坛)

您好,请问你多多肽加荧光标签是自己合成的吗
4楼2016-12-19 17:14:21
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