| 查看: 1601 | 回复: 11 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
蛋白质纯化问题 已有3人参与
|
|||
|
现在目前遇到的问题： 1，超滤过程中蛋白质的去除率能够达到多少，有篇文献上，题名“Simplified purification of equine chorionic gonadotropin (eCG) – an example of the use of magnetic microsorbents for the isolation of glycoproteins from serum”表2中，达到了98% 2.不知道这种酸性蛋白能不能用阳离子交换树脂进行纯化，可是真的有发现，文献比我的蛋白等电点p低的ecg用了阳离子交换树脂，“题名”Extraction of Equine Chorionic Gonadotrophin from Pregnant Mare Plasma by Direct Adsorption on Chromatographic Media“。 3，离子交换介质的上样缓冲液，假如是乙酸钠缓冲液，那洗脱的时候能否使磷酸盐缓冲液。 4，由于活性的测定过程比较麻烦，费钱费力，所以不能更多的尝试方法。 |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。
已经有5人回复
-
324求调剂
已经有8人回复
-
284求调剂
已经有12人回复
-
348求调剂
已经有3人回复
-
329求调剂
已经有7人回复
-
求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕
已经有4人回复
-
考研调剂
已经有9人回复
-
304材料求调剂
已经有4人回复
-
一志愿郑大085600，310分求调剂
已经有3人回复
-
317求调剂
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于蛋白质纯化的问题
已经有6人回复
- 蛋白纯化问题，希望大家给我支支招，成分感谢
已经有41人回复
- 纯化 蛋白降解？
已经有7人回复
- 做蛋白质纯化 该怎么脱盐
已经有6人回复
- 目的蛋白表达纯化，求教高手
已经有12人回复
- AKAT 蛋白纯化仪 分离纯化相关问题求助
已经有11人回复
- 蛋白质纯化后的蛋白纯度怎么计算
已经有5人回复
- 蛋白质纯化中硫酸铵沉淀后沉淀溶解的问题
已经有11人回复
- 蛋白表达及纯化
已经有29人回复
- 求镍柱子纯化表达蛋白的具体步骤，注意事项！！！
已经有5人回复
- 关于Hs tag 蛋白纯化后蛋白不纯的问题
已经有6人回复
- 纯化蛋白时关于溶液中咪唑的问题
已经有7人回复
- 蛋白质的Ni柱纯化问题
已经有23人回复
- 求助各位大神关于含组氨酸标签蛋白纯化的问题
已经有8人回复
- 关于蛋白质纯化柱子的问题
已经有9人回复
- 带HIS标签的可溶蛋白的纯化问题
已经有20人回复
- 蛋白质纯化与鉴定实验指南[l冷泉港]中译本
已经有661人回复
- HPLC可以对蛋白进行纯化？
已经有21人回复
- 蛋白纯化分离问题
已经有19人回复
- 【求助/交流】蛋白质分离纯化系统
已经有14人回复
calorimetry
铜虫 (正式写手)
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 126.8
- 红花: 13
- 帖子: 569
- 在线: 36.5小时
- 虫号: 3901654
- 注册: 2015-06-01
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bao可雅: 金币+20 2015-07-06 09:49:36
感谢参与，应助指数 +1
bao可雅: 金币+20 2015-07-06 09:49:36
|
我说一次选择离子交换柱的一般原则。 在考虑离子交换剂（离子交换功能基团）的强弱时，如果目的蛋白质很稳定，应首先选用强交换介质，强交换介质的动力载量不会随pH值的不同而改变，离子交换过程遵循最基本的吸附原理。所谓的蛋白质的稳定性，一般可从其耐受的酸碱性、离子强度、温度范围这几个角度考虑，考虑蛋白质的稳定的极限是防止蛋白质变性，而不是发生蛋白质共价修饰，甚至降解。用各种层析柱分离提纯蛋白质时，一般不是常温，就是低温，所以通常不必考虑温度对于需要层析的目的蛋白质的影响，但是蛋白质的酸碱性和离子强度的耐受性则必须要考虑。这点是很多蛋白质分离提纯的新手所容易忽略的。 使用强离子交换介质允许较大的吸附pH及离子交换强度选择范围，目的分子吸附后只需要提高缓冲的盐浓度即可洗脱，同时可有目的分子的浓缩效应。而若离子交换介质pH适用范围较小，在pH小于6时，弱阳离子交换介质失去电荷，而在pH大于9时，弱阴离子交换介质失去电荷。所以，一般情况下，在分离等电点pH 6-9的目的蛋白质，尤其是当目的蛋白质分子不稳定时，需要较温和的色谱条件才会选用弱交换介质。对于未知的蛋白质进行离子交换层析柱分离提纯时，也建议首先使用弱交换介质。 楼主的蛋白质的等电点在2.2，如果选择阳离子交换层析，你的缓冲溶液的pH必须要低于2.2，保证你的目的蛋白质能够带上正电荷，进而能够挂在阳离子交换层析柱上。真的有没有缓冲溶液到了这样的pH还有缓冲容量？我是没有听说过，可能以后会有吧。 当然，利用阴离子交换层析柱就很方便了，只要你的缓冲溶液的pH高于于2.2，保证你的目的蛋白质能够带上负电荷，进而能够挂在阴离子交换层析柱上就行。这样的缓冲液很容找到。 超滤一般只能够用于去除无机和有机小分子，这些小分子至少与一般的常见蛋白质的相对分子量相差2个数量以上，这是超滤离心管的滤膜的孔径决定的，由于一个超离心管就只有一层膜一种滤过孔径，所以凡是不能穿过的蛋白质都留下了，所以超滤离心管根本不可能用于分离纯化不同的蛋白质！跟不要说什么分离效率了。超滤离心管是除去小分子物质的. |
9楼2015-06-18 14:00:10
2楼2015-06-16 20:59:23
 |
3楼2015-06-16 21:29:17
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19474.4
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6590
- 在线: 2778小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
4楼2015-06-16 21:53:07
