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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 请教真菌发酵感染芽孢问题解决方法
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陌路人A

铁杆木虫 (知名作家)

一粟 ▪ 陌路

[求助] 请教真菌发酵感染芽孢问题解决方法 已有5人参与

真菌发酵（10吨和20吨罐）连续出现感染芽孢问题，空气过滤器，补料过滤器做无菌验证均没问题；接种前无菌样肉汤培养也无染菌迹象。无法确定感染源，请有经验的前辈指导。同时请教感染芽孢后该如何处理罐体才能从根本上杀灭芽孢（我现在用甲醛熏蒸和蒸汽空消）。另外发酵过程中染菌，还未明显影响生长时该如何灭菌呢？

请教真菌发酵感染芽孢问题解决方法
IMG_20150421_092410.jpg
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愿心，随风而舞~~~
1楼 2015-05-09 17:44:29
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陌路人A

铁杆木虫 (知名作家)

一粟 ▪ 陌路
没有回复的。。。自己顶贴~
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愿心，随风而舞~~~
2楼2015-05-10 10:24:16
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virty76

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
陌路人A: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢~ 2015-05-10 15:18:10
应该重消空气过滤器，或者选择重装空气过滤器。消后肉汤无菌样没问题可能是取样少。空气过程多为粗杆菌，为梅雨季节易影响发酵，可增大接种量，或早期控制罐温。蒸汽染菌多为细杆,注意灭菌后关总阀门，并掉零磅

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2015-05-10 14:54:14
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陌路人A

铁杆木虫 (知名作家)

一粟 ▪ 陌路
引用回帖:
3楼: Originally posted by virty76 at 2015-05-10 14:54:14
应该重消空气过滤器，或者选择重装空气过滤器。消后肉汤无菌样没问题可能是取样少。空气过程多为粗杆菌，为梅雨季节易影响发酵，可增大接种量，或早期控制罐温。蒸汽染菌多为细杆,注意灭菌后关总阀门，并掉零磅
...

空气过滤器重装不太现实，不过仔细的消过，也做过无菌验证都没问题，所以比较纠结到底是什么地方出问题。接种量不敢太大，不然后期会加大补料风险。显微（如图）显示为规则短杆，初步判断是芽孢杆菌，请问它的来源会有哪些方面呢？
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愿心，随风而舞~~~
4楼2015-05-10 15:23:57
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小花木兰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
陌路人A: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-05-10 19:11:16
菌种本身有芽孢菌，所以你怎么做都是染的
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5楼2015-05-10 16:38:14
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陌路人A

铁杆木虫 (知名作家)

一粟 ▪ 陌路
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小花木兰 at 2015-05-10 16:38:14
菌种本身有芽孢菌，所以你怎么做都是染的

这方面确实没想到～
不过不太可能吧。。。一级二级种子罐没有染菌迹象。

[ 发自小木虫客户端 ]
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愿心，随风而舞~~~
6楼2015-05-10 19:12:25
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Micah1011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
陌路人A: 金币+5, ★★★很有帮助, 这个可以试试。谢谢~ 2015-05-12 10:20:52
建议种子在营养琼脂上划线试试看种子有没有带菌

[ 发自小木虫客户端 ]
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每天叫醒我的不是闹钟，是梦想；每天让我做实验的不是老板，是兴趣
7楼2015-05-11 17:03:56
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aming2003

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
陌路人A: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢，现在验证主要是罐顶减速机密封有问题。 2015-06-11 12:09:35
1.解决这个问题不要急；2.一定要建立排查染菌原因的方法，因此要尽可能收集所做工作的染菌情况，然后分析着手点；3.所有染菌分析方法一般教科书都能查到，你缺的不是知识；4.芽孢杆菌在10吨罐和20吨罐出现，检查过滤系统和发酵罐后，先做发酵罐的的空白培养（一般要48hr以上），空白培养48hr以上如无染菌迹象，则可能是种子本身有问题。5.应找方法确定每个环节无误，最后定能解决染菌问题。
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8楼2015-06-10 12:06:08
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
陌路人A: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢，验证是罐顶减速机密封的问题。 2015-06-11 12:10:38
样品批次多取些，全部做梯度稀释涂布法测活菌，2种平板培养基，一种为测真菌培养基（加青霉素抑制细菌生长），一种一般的LB培养基，观察菌落形态作对比，先确定菌种的问题。如果真的有杂菌了就要对发酵车间和发酵罐进行严格的灭菌和消毒了。
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9楼2015-06-11 11:26:52
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