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[求助]
甲基化引物设计
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下面是我的目的原序列，需要设计两对甲基化引物用来做巢式或半巢式PCR,扩增出包含630位点附近几个bp序列的一段序列，还要求CpG位点不少于20个，设计过的引物上游有U211 U375 U213 U419 U484，下游引物有L834，L1083，L1247,L1248，L1610，均搭配使用过，快半年了但都未扩出带来，求大神帮忙设计引物，指点迷津，感激不尽！！！ CTTTAAGAGGAAACTCAAAAGCCAACAGAATTCTGAGGGAGGCTCACACACCCCTTACTGTTTTGCAAAT GGCTCACTTAGCCCGCGGTGGGGCTACCAGTGAGACTGGTGGCATCTTTCTCTTTGAGTCCCCGGGTCTA AAGAAATGAGTCCAGGGTCTTCGGAGAGGGTTGGCACCTGCAGCGTCACTCCAAAATCATTAGCTACTCC TTTGGGCAAAAGGAGCACAGTTTGAACCAGGCTCTGCCAGTTGCCCACGGCCCACAGTAGCCTGAGGTCC ATCAGTTGCCCCTGGCCCGCTAATTCCCCAATTCTGCCAATACTCCATGGATTGCCAGATACCCACAGCT TGCCAGTTTCCCAATGTCTGCCAGTTGTTCGCGGTCTGCCAGTTGCTCAGAACCCGCCAGATACCTGTGA CCTGCCAGTTGCCCATGTCCTGCCAGTTGCCTGAGACTTGCCAGTTGCCCATGGTCCTCCGCCAGATGCC CATGACTGGCCAGATGCCCGTGACCGGCCAGATGCCCAAGACCCACCAGTTGCCCATGATCCACCAGCTC CCCACGGTCTGCCAGTTCCCTGAGACCCGCCAGTTGCCCGCGGTCCACCAGTACTCCGTGATCTGCCAGT TGCCCACGGTCCTCCGGAGGCCCGAGACCCGCCAGATGCTCGTGACCGACCAGATGCCCAAGACCTGCCA GTTGCCCGTGACCCGCCAGTTGCCTGCAGTCTATCAGTTGCCCCCAGTCTGCCAGTTGCCCCTGGTCCAT CAGTTGCCCGCGGTCCGCCAGTTGCCCCCAGTCCATCAGTTGCCCCCAGTCTGCCAGCTGCCCCCGGTCC ATCAGTTGCCCCCAGTCCGCCAGCTGCCCCCGGTCCATCAGTTGCCCGCGGTCCGCCAGTTGCCCCTGGT CCATCAGTTGCCCGCGGTCCGCCAGTTGCCCGCGGTCCGCCAGTTGCCCGCGGTCCACCAGTTGCCCCCA GTCTATCAGTTGCCCGAGACCCGCCAGTGACCCGAGGCCCACTGAACTGTCTTCCCGCAGCGTTGTAATT GCCTCTTCGGATCTGCCCTGATGCCCTAGGGGTCCCGGCCTTTCTCGGCTTCTCTGTGATTTAACCGCCG TTCACCCTTGTTTGGGACTTCCCGCACCTCTGTGATTCTCAGGTTCTGATTTCAAGGTACACACAACATA GCGTCAAGCCCAGTGATTCTCGGGCAACTCTGCGCATCCTCTTGAGGGTGTGCTGAAATTCTGCCGTGGA GATTGACCTTTCTTCCTACTTAGGGAAACCGTTGTGGGGGGGTGCGGCTCCAAAGATTCGATTCTCCTGC TGAGAGTCTGTCTGTAACCCTGTCTTTCCCCTGATGGTTTGTGTGGTTCTGGCCCCCCACCCGGTGAATG AGAGAAGCCA GTTTGGGATTCTCCCAAACTGGAAGACAAAAGACCCATTTCCTCTCATTGTTGTGGTAAATAAATGAAGT AGGTGTTGTAGTGTGGTTCCTGAAAATACTGTGAACTGTGTGAGCATGCCAGAATCAATGCCCTCAAGAA ACACAATGTGTGGGTGACCACACTGGCTTCTCTCCGTGTCTGGGGAAAAACAGTGTTGCCAGAAAGGCTT TGCCTGGGCTGCGGCAGCAGCTGACCTCCCGCCAAGGTGAACCCCTTATATTTCATCCTTAGAAGCTGTT CCTTGCCACCCAACTGGGGACACCCTGCTACTTTAAGAAGAGAAAGAGGGGTAAAGACTCACATACTTCC TGACTCCAGAGGTGGGGTGGCCCCCAACCTAGCCTGCTGTTTTGCAAATGTCTCTCCCCAGCGGGGCTGA ACTATTGGGGTGGGGGTGGCTTGATGCTCCTAGAAGGAGATCGGCATATCCTCCTCTTTCAGGCCTGGGA TCTAAACTGTTGAGTTTTGCAGATTTGGTCCCTATAGCTCCACTCTTCGAGTGAAGAGACCACAGCTCTG CCGCACCGAGGGGAGGCTGTGGGGTGGCTCGGGGGCCAGGGCAGTATGCAAGCCCCAGACTCAATCGGGG |
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