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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 构建载体时酶切位点的问题，请有经验的前辈们指导一下！！
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小熊bakery

铜虫 (初入文坛)

[求助] 构建载体时酶切位点的问题，请有经验的前辈们指导一下！！ 已有4人参与

现在要构建载体，要加入几个酶切位点，有两个酶切位点其中的一个TAKARA的buffer推荐的是M+BSA 另一个是M，可不可以同步双酶切呢？
还有构建载体的时候用平末端连接的效率会不会很低呢？
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1楼 2015-04-27 17:20:02
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沉默的独角兽

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
TaKaRa产品目录上有双酶切的buffer吧。
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2楼2015-04-27 17:31:04
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小熊bakery

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 沉默的独角兽 at 2015-04-27 17:31:04
TaKaRa产品目录上有双酶切的buffer吧。

目录上的双酶切buffer只是一部分酶的，我要用的这两种没有
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3楼2015-04-27 18:19:24
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
推荐用thermo的快切酶，不用考虑buffer，切的又快又好。（不是广告）
平末端连接效率是会低很多，现在好像有专门适用于连接平末端的酶，效率可能会好些，这个没用过，自己可以多咨询试剂公司。
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4楼2015-04-27 20:26:39
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-28 09:22:36
本帖内容被屏蔽
5楼2015-04-27 20:52:24
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sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以双酶切，ＢＳＡ加入，因为BSA主要的作用是稳定酶
双平末端连接需要去磷酸化，连接过夜，单平末端配合粘性末端连接效率和双粘性末端在我做的看来基本一致。
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6楼2015-04-28 10:29:41
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