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gaoshengg

铁虫 (初入文坛)

[求助] 蓝藻DNA提取

我在提取蓝藻DNA时,出现大量短片段DNA,长片段DNA量很少,请教下原因。
直接取的蓝藻,由于难以离心沉淀蓝藻,所以蓝藻都是浮在湖水表面上,我吸取约500ul 的含有蓝藻的湖水到ep管中,吸取并弃掉约400ul的湖水,然后开始提取DNA。
1.        加入溶菌酶消化液300ul 和300ul裂解缓冲液(终浓度为10mg/ml,Nacl 100 mmol/L,Tris-Hcl 50mmol/L, EDTA 100 mmol/L pH8.0)在分子杂交仪器中37度旋转颠倒3h。
2.        加入蛋白酶K(20mg/ml Tris-Hcl  50 mmol/L,Ca(CH3COO)2 1.5 mmol/L)3ul,37度水浴2h.
3.        94度水浴10min,灭活蛋白酶K,冷却到室温。
4.    加入100ul 5mM Nacl,13000rpm 离心5min,出去细胞碎片。
5.   将上清转移到新的ep管中,加入600ul 异丙醇沉淀,室温放置10min,13000rpm 离心10min。
6.   70%乙醇洗涤4次,室温烘干10min
7.   加入水溶解  

由于这个DNA量很少,因此无法用苯酚氯仿抽提,因而直接沉淀了,我想知道为什么会出现100到500的短片段,以及改进的方法,谢谢了!
Marker 左边是Hind 3,右边是DL2000

蓝藻DNA提取
gqy 2015-04-22 10hr 22min.jpg
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sighteddy

新虫 (初入文坛)

您好,我最近也在提取蓝藻DNA,几乎出不来,也出现小片段的弥散带,请问一下怎样提高提取DNA产量和质量?
2楼2016-10-31 17:26:36
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