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蓝藻DNA提取
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我在提取蓝藻DNA时，出现大量短片段DNA，长片段DNA量很少，请教下原因。 直接取的蓝藻，由于难以离心沉淀蓝藻，所以蓝藻都是浮在湖水表面上，我吸取约500ul 的含有蓝藻的湖水到ep管中，吸取并弃掉约400ul的湖水，然后开始提取DNA。 1. 加入溶菌酶消化液300ul 和300ul裂解缓冲液（终浓度为10mg/ml，Nacl 100 mmol/L，Tris-Hcl 50mmol/L， EDTA 100 mmol/L pH8.0）在分子杂交仪器中37度旋转颠倒3h。 2. 加入蛋白酶K（20mg/ml Tris-Hcl 50 mmol/L，Ca(CH3COO)2 1.5 mmol/L）3ul，37度水浴2h. 3. 94度水浴10min，灭活蛋白酶K，冷却到室温。 4. 加入100ul 5mM Nacl，13000rpm 离心5min，出去细胞碎片。 5. 将上清转移到新的ep管中，加入600ul 异丙醇沉淀，室温放置10min，13000rpm 离心10min。 6. 70%乙醇洗涤4次，室温烘干10min 7. 加入水溶解 由于这个DNA量很少，因此无法用苯酚氯仿抽提，因而直接沉淀了，我想知道为什么会出现100到500的短片段，以及改进的方法，谢谢了！ Marker 左边是Hind 3，右边是DL2000  gqy 2015-04-22 10hr 22min.jpg |
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