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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有用过PI染蓝藻细胞，然后用流式细胞仪检测细胞周期的吗？
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dreamway2013

新虫 (初入文坛)

[求助] 有用过PI染蓝藻细胞，然后用流式细胞仪检测细胞周期的吗？ 已有4人参与

我一直在摸索检测蓝藻周期的方法，看了很多文献，选用了PI染料，用的70%乙醇固定，37度水浴染色30分钟，上流式得到的图形荧光强度很低，得不到想要的图形，求做过的或者测过其他细菌的细胞周期的高手指点！我不甚感激，可以多交流！

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1楼 2013-12-26 00:39:11
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蓝空孤月

禁虫 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-26 13:04:12
本帖内容被屏蔽
2楼2013-12-26 12:08:50
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dreamway2013

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 蓝空孤月 at 2013-12-26 12:08:50
没明白，PI染后，荧光是红的。蓝藻本底荧光也是红的，你是怎么判定的？（你确定你看了很多文献？）

谢谢你的回复！我不是用荧光显微镜观察荧光颜色，而是用PI染色DNA后用流式细胞仪测，观测其DNA是单倍还是双倍，还是介于其间？从而判定其属于细胞周期的哪一期。有文献报道过此种方法，只是我测出来的图像效果不好，不知道亲您是否做过类似实验？

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3楼2013-12-26 20:16:13
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b6122

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-12-30 08:24:08
引用回帖:
3楼: Originally posted by dreamway2013 at 2013-12-26 07:16:13
谢谢你的回复！我不是用荧光显微镜观察荧光颜色，而是用PI染色DNA后用流式细胞仪测，观测其DNA是单倍还是双倍，还是介于其间？从而判定其属于细胞周期的哪一期。有文献报道过此种方法，只是我测出来的图像效果不好 ...

我觉得你没有正确理解楼上的问题。流式同样是通过荧光测定，如果背景荧光很强，会干扰你要检测的荧光。
我没做过蓝藻的细胞周期。但是以我的经验来看，你首先要确定你的蓝藻染上色了。如果你在荧光显微镜下看到染色后荧光明显增强就算染上了。染上色的样品如果检测值低，就需要调检测器电压。如果是背景干扰造成，你就需要开一个背景通道作补偿。如果还是无法区分，你就换染料吧，能染核酸的染料很多。

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4楼2013-12-27 09:26:03
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dreamway2013

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dreamway2013 at 2013-12-26 20:16:13
谢谢你的回复！我不是用荧光显微镜观察荧光颜色，而是用PI染色DNA后用流式细胞仪测，观测其DNA是单倍还是双倍，还是介于其间？从而判定其属于细胞周期的哪一期。有文献报道过此种方法，只是我测出来的图像效果不好 ...

谢谢您的回复，给了我一些启发！我确实没有镜检，但是在流式上了未染色的空白样，它和染色的样品荧光确实差距较大…

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5楼2013-12-30 00:16:10
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蓝空孤月

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-04-17 09:48:23
本帖内容被屏蔽
6楼2013-12-30 10:47:26
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dreamway2013

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 蓝空孤月 at 2013-12-30 10:47:26
那我就更不明白了，蓝藻是原核的，它的染色体数是不固定的，少的时候几条，多的时候上百条，没单双倍一说吧。你是不是只看了中文的文献？最好不要试图去重复中文的。或者你和原作者联系吧，看看人家怎么看，

说 ...

谢谢您的评论！中文文献基本没有，都是外文文献，这种实验方法没有问题，有几篇外文文献报道过，可能是实验条件没有优化，昨天我已经给文献作者邮件了，希望能得到点有用建议～

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7楼2013-12-30 15:29:03
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sdauszf

新虫 (小有名气)
楼主你好，我也在摸索流失细胞仪测藻类细胞周期的方法，请问你的方法得到满意结果了吗？求帮助
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8楼2014-04-07 18:38:10
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dreamway2013

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sdauszf at 2014-04-07 18:38:10
楼主你好，我也在摸索流失细胞仪测藻类细胞周期的方法，请问你的方法得到满意结果了吗？求帮助

没有，做了半年多了也没测出来，不知道您进展如何？我们可以多多交流，相互学习

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9楼2014-04-17 00:19:47
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nnssa

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主有找到方法解决吗，我也在尝试测定蓝藻的分裂以确定生长抑制情况，一直没有招待合适的方法（原核细胞增殖无明显周期性，以无丝分裂进行。。。。。不晓得如何让应对了）
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10楼2015-01-09 16:43:30
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